[发明专利]调节NF-κB的人遍在蛋白连接酶E3

说明书

本申请是1999年12月9日提交的申请号为99814307.3(PCT/US99/29371)，发明名称为“调节NF-κB的人遍在蛋白连接酶E3”申请的分案申请。

技术领域

本发明在总体上涉及用于调节核因子κB(NF-κB)活化的组合物和方法。本发明具体地涉及调节磷酰化IκBα和/或IκBβ的遍在蛋白化的物质，以及与NF-κB活化相关的疾病的治疗方法。本发明所使用的调节剂包括E3遍在蛋白连接酶、其部分及其变体。

发明背景

NF-κB是一种转录因子，它在针对免疫、炎症及急性期的应答基因(包括白细胞介素1、白细胞介素8、肿瘤坏死因子和某些细胞粘附分子)所观察到的基因表达的高特异模式中起关键作用。如同转录激活因子Rel家族的其他成员，NF-κB以非活化形式被隔离在大多数细胞类型的胞质中。包括促细胞分裂原、细胞因子、抗原、应激诱发剂、UV光和病毒蛋白在内的多种细胞外刺激物引发信号转导途径，该途径最终导致NF-κB的释放和活化。

重要的NF-κB活化调节剂是抑制剂蛋白IκBα和IκBβ(在此称作IκB)，它们与未受激细胞的胞质中的NF-κB结合(并因此失活)。在发生信号引导的IκB磷酰化之后，发生NF-κB的活化和核易位，这导致经遍在蛋白途径发生蛋白质的水解。对于IκBα，刺激诱发的在第32和36位丝氨酸上的磷酰化使所述抑制剂成为在第21和22位赖氨酸上遍在蛋白化的目标靶，而这将导致降解。与之相似，IκBβ在第19和23位丝氨酸上的磷酰化使所述抑制剂成为在第9位赖氨酸上遍在蛋白化的目标靶。然而，还没有鉴定出介导IκB识别的遍在蛋白系统的成分。

蛋白经遍在蛋白途径的降解通过两个非连续和连续步骤进行：(a)多个遍在蛋白分子共价附着到蛋白底物上，和(b)通过26S蛋白体复合物降解靶蛋白。遍在蛋白途径包含了多种成分，这些成分以分级方式共同发挥作用(综述参见Ciechanover，Cell 79：13，1994；Hochstrasser，Curr.Op.Cell.Biol.7：215，1995；Jentsch and Schlenker，Cell 82：881，1995；Deshaies，Trends Cell Biol.5：428，1995)。单一E1酶是一个这样的成分，它进行遍在蛋白的激活。在哺乳动物细胞、植物和酵母中分析表征了一些主要的E2酶。E2酶可能与连接酶E3结合(Reiss and Hersko，J.Biol.Chem.265：3685，1990；Dohmen et al.，Proc.Natl，Acad，Sci.USA 88：7351，1991)，似乎每种E2酶都能与一种或多种E3蛋白作用(Nuber et al.，J.Biol.Chem.271：2795，1996；Orian et al.，J.Biol.Chem.270：21707，1995；Stancovski et al.，Mol.Cell.Biol.15：7106，1995；Gonen et al.，J.Biol.Chem.271：302，1996)。