[发明专利]一种化学-生物酶法组合制备2′-脱氧尿苷的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种化学-生物酶法组合制备2′-脱氧尿苷的方法。 

(二)背景技术

2′-脱氧尿苷属于核苷类似物，它在化学结构上与天然核苷有着不同程度的相似之处，在体内有以假乱真之效，从而干扰或直接作用于核酸的代谢过程，阻断蛋白质、核酸的生物合成，在抗肿瘤，抗病毒药物中具有非常重要的地位。同时是其他核苷类药物的重要中间体。 

合成2′-脱氧尿苷的方法主要包括以下三种： 

1、从天然产物中获得核苷，再经过化学结构修饰得到。但这种方法存在着原料不足的缺点，无法满足市场的需求。 

2、化学全合成法，但此方法合成得到的往往是α/β混合构型的产物，而具有良好药效的往往是β构型的产物，同时化学合成过程中的糖苷化过程使用了大量昂贵有毒的化学试剂，环境污染严重。 

3、核苷磷酸化酶生物转化法，此方法是采用其他天然的脱氧核苷为底物，在核苷磷酸化酶的作用下加入尿嘧啶与天然核苷的碱基进行交换，得到2′-脱氧尿苷。这种方法虽然条件温和，反应选择性高，但是同样存在原料不足的问题，且成本较高。 

结晶诱导不对称转化技术是一项控制化学立体异构体的前沿技术。最早报道的例子是含有不对称构型的立体异构体的平衡体系转化成最稳定的非对映体近体形式。许多例子都显示结晶诱导不对称转化技术能得到最稳定的非对映异构体晶体，不管平衡体系中的含量如何，以混合物为基础 转化率可接近100％。结晶诱导不对称转化技术是热力学相平衡的结果，它是一个有效控制单一异构体的有效技术。它需要的一个重要条件是非对映体的转化速率比结晶速率快，另一个条件是其中一个对映体必须在合适的温度结晶。不对称合成的背景是结构包含对映异构体，而结晶诱导技术是一种得到单一异构体的直接实用的方法。 

诱导结晶立体异构转化(CIST)根据原理可以分为两类：诱导结晶对映结构体转化(CIET)和更平常的诱导结晶非对映异构体转化(CIDT)。CIST的发现大部分基于意外。直到20世纪后期CIST才开始在不对称合成中被应用为一个设计因素。 

对应异构体和非对应异构体的混合物表现出来不同的结晶行为是由于镜像的立体异构体能够结晶成聚集物(每个细胞有一个单的对映异构体的纯的对应异构体的机械混合物)，外消旋化合物(每种对映异构体在单元中以1∶1存在)，和立体(固体)溶液(有时候也叫假的外消旋物；两种对映异构体都是以非固定的比例存在于浓缩相中)。这些结晶行为的根本不同表现在这些固体的物理性质的不同(如熔点的不同和溶解度的不同)。同样地，非对映异构体可以以三种类似的形式结晶。通常，非对映异构体产生共晶混合物(这些化合物作为单独存在的实体结晶，像聚集物行为)。然而，非对映异构体有时候会结晶成外消旋类似物(两个结构相似的和形态上类似对应体过量的化合物)或者作为固体溶液(也经常叫做混合晶体；一种非对映异构体代替另一种没有很大地影响晶体结构)。CIDT仅在非对映异构体作为共晶混合物的时候是可行的。 

核苷磷酸化酶广泛分布于动植物器官和微生物中，它参与胞内核苷代谢，在补救途径中催化核苷或脱氧核苷可逆磷酸化反应，提供核糖-1-磷酸，并释放出碱基，加入其他碱基可导致形成另一种新的核苷。 

酶法合成核苷类药物的原理是利用微生物中产生的核苷磷酸化酶催化核苷、碱基转换反应，即由廉价供应的天然核苷为原料，将其核糖基进行化学修饰后作为核苷及供体，利用核苷磷酸化酶或脱氧核糖转移酶为酶源，天然的杂环碱基为核糖基受体，通过酶催化合成核苷及其类似物。此反应过程包括两个过程： 

(脱氧)核苷1+磷酸＝(脱氧)核糖-1-磷酸+碱基2 

(脱氧)核糖-1-磷酸+碱基1＝(脱氧)核苷2+磷酸 

其中碱基1可以是嘌呤、嘧啶或其类似物。酶的来源可以是天然菌株，也可以是基因工程菌株。利用此反应可以合成多种核苷类似物，在实际工作中也可以仅通过第二部反应来合成所需物质。 

酶的高效率、专一性及温和的反应条件使酶在生物体新陈代谢中发挥了巨大的作用，酶活力的调控使生命活动中各种反应得以有条不紊的进行。因此酶被广泛的应用于医药、食品、农业和化工产品的生产及研究。酶在合成过程中具有高度的化学、区域和对映体选择性，生产过程一般无毒、无污染、低耗能，是一种环境友好的合成方法，将为绿色化学作出贡献。 

(三)发明内容

本发明所要解决的问题是化学法合成2′-脱氧尿苷是存在的无法得到单一异构体的问题，以及生物酶法合成过程中存在的原料不足以及高成本问题。 

本发明采用的技术方案是：