[发明专利]一种卤醇脱卤酶的生产方法

权利要求书

1.一种卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：所述生产方法包括以下步骤：

（1）、构建基因工程菌，配制摇瓶种子培养基和发酵培养基；所述基因工程菌为表达了卤醇脱卤酶的重组大肠杆菌；

（2）、使基因工程菌斜面活化20~25小时，再将活化后的基因工程菌接种至装有摇瓶种子培养基的摇瓶中，在37℃的条件下振荡培养8~15小时，得到种子液；

（3）、将经步骤（2）振荡培养后的种子液接入发酵培养基中进行发酵，按体积比，接种时种子液/发酵培养基=1%~10%；发酵培养的温度控制在25~37℃，发酵液的pH值控制在6.5~7.0；当发酵液中的细胞光密度≥20时，向发酵液中添加诱导剂，且诱导剂在发酵液中的加入质量占发酵液总量的0.01%~0.2%；然后继续发酵10~15小时；

所述发酵培养基的组成包括：酵母粉9~15g/L、甘油4.5~7.5g/L、NaCl 8~11g/L、NaNO₃ 1~2g/L，KH₂PO₄ 2~3g/L，K₂HPO₄ 12~13g/L，微量元素2~5mg/L；

（4）、从经过步骤（3）的发酵液的培养物中取得所述卤醇脱卤酶。

2.根据权利要求1所述的卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：所述发酵培养基中的微量元素包括CoCl₂·6H₂O、MnCl₂·4H₂O、CuCl₂·4H₂O和生物素。

3.根据权利要求1或2所述的卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：所述发酵培养基的组成包括酵母粉12g/L、甘油6g/L、NaCl 10g/L、NaNO₃ 1.44g/L、KH₂PO₄ 2.4g/L，K₂HPO₄12.5g/L，微量元素2~3mg/L。

4.根据权利要求1所述的卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：所述诱导剂为异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷。

5.根据权利要求1所述的卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：步骤（3）的发酵过程中，添加诱导剂前控制发酵液的pH值在6.5~6.6之间，添加诱导剂后控制发酵液的pH值在6.8~6.9之间。

6.根据权利要求1所述的卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：步骤（3）的发酵过程中，添加诱导剂前的发酵温度控制在37℃；添加诱导剂后的发酵温度控制在28℃。

7.根据权利要求1所述的卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：步骤（3）的发酵过程中，发酵液中的溶氧控制在20%~25%。

8.根据权利要求1所述的卤醇脱卤酶的生产方法，其特征在于：所述摇瓶种子培养基的组成包括蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 10g/L和卡那霉素50ug/mL，且pH值为7.0。