[发明专利]特异性检测转基因大豆DP-356043的标准质粒分子及其应用

权利要求书

1.一种特异性检测转基因大豆DP-356043的标准质粒分子，其特征在于其序列如SEQ ID No:8所示。

2.如权利要求1所述的一种特异性检测转基因大豆DP-356043的标准质粒分子的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

以转基因大豆品系DP-356043基因组DNA为模板进行PCR扩增；反应体系为：总体积为50μl，其中10倍的PCR反应液5μl，dNTPs 4μl,上下游引物20μM各1μl，模板5μl，Taq DNA聚合酶0.5μl，用ddH₂O补足至50μl；

反应程序为：94℃ 5分钟；然后进入以下循环94℃ 50秒， 55℃ 50秒,72℃ 60秒，共30个循环；最后72℃延伸5分钟；产物记为： P_DP356043 SEQ ID No:1、 P_Lectin  SEQ ID No:7；

将P_DP356043和P_Lectin克隆进pMD18-T载体，分两步进行：

第一步：采用pMD18-T为基础载体将上步PCR扩增的P_DP356043片段SEQ ID No:1采用T-A克隆的方式连接到载体中；

第二步：用限制性内切酶Hind III和PstⅠ将P_Lectin片段SEQ ID No:7和含有P_DP356043片段的pMD18-T重组质粒分别进行双酶切；然后用T₄连接酶将二者连接；获得将转基因大豆品系DP-356043品系特异性序列片段及大豆内源标准基因Lectin特异性片段融合在pMD18-T上的标准质粒分子，将其命名为pMD-DP356043，其序列如SEQ ID No:8所示,将pMD-DP356043导入大肠杆菌JM109即可长期保存使用。

3.如权利要求2所述的一种特异性检测转基因大豆DP-356043的标准质粒分子的构建方法，其特征在于所述的引物序列如下：

DP356-F：AACGGATTTGGACCATTGCGTC   SEQ ID NO:3 

DP356-R：GTAATTGTTAATGCTTCGGAAG   SEQ ID NO:4

LN-F： GCAAGCTTAAGGCAAACTCAGCGGAAAC    SEQ ID NO:5

LN-R：AACTGCAGAGTGTCAAACTCAACAGCGAC    SEQ ID NO:6。

4.如权利要求1所述的一种特异性检测转基因大豆DP-356043的标准质粒分子在检测转基因大豆DP-356043品系中作为阳性标准物质的应用。