[发明专利]转基因大豆BPS-CV127-9转化事件外源插入载体旁侧基因及其应用

权利要求书

1.转基因大豆BPS-CV127-9转化事件外源插入载体旁侧基因，其特征在于：其序列如序列表中1所示，为：

aaagttgcat ccaacattct ctttaattca gtacaagagc tccttcgccg tttagtgtat    60

aggaaagcgc aaactgatgt ttggaagctt gaaacggcaa taaaatatca aaatctttat    120

attaaagctg aacaaaaggg gccctcctta tttatcccct tagtttttat tttcatttct    180

ttctaataaa ggggcaaact agtctcgtaa tatattagag gttaattaaa tttatattcc    240

tcaaataaaa cccaattttc atccttaaac gaacctgctg aaaccctaat ttcgattacc    300

aattccgatc taaaaagaag tcatggaagc cattgattcc gcaatcgatc ctctcagaga    360

tttcgctaag agcagtgttc gtctcgtcca gcgctgtcac aaacccgatc gcaagggtaa    420

cgccttttct caaaaaaatc tcatttccga tttttgatct gtagattagg gttttctgaa    480

attttgatat catttgtaat tgaattggtt atcagaattc acgaaagtag ctgtgcgtac    540

ggcg                                                                 544。

2.权利要求1所述的转基因大豆BPS-CV127-9转化事件外源插入载体旁侧基因的提取方法，其特征在于：步骤为：

(1)提取转基因大豆BPS-CV127-9基因组DNA：采用4种限制性内切酶DraI、EcoRV、PvuII、StuI充分酶切，对酶切产物进行纯化；

(2)引物设计：利用clontech GenomeWalker试剂盒提供的接头引物AP1和AP2，其序列分别为：

AP1：5’-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3’；

AP2：5’-ACTATAGGGCACGCGTGGT-3’；

另外，参照BPS-CV127-9插入载体结构序列设计引物序列如下：

AT1：5’-CCAACGATGATGTTGTTGATTGGGATG-3’；

AT2：5’-AACGAATCCCATCACCACAAATCCAAT-3’；

(3)以转基因大豆BPS-CV127-9基因组酶切产物为模板进行两轮PCR扩增，引物对AP1和AT1用于第一轮PCR反应，扩增体系20μL，PCR程序为94℃25s，72℃3min，6个循环；94℃25s，64℃30s，36个循环；64℃延伸7min，1个循环；引物对AP2和AT2用于第二轮PCR，在第二轮PCR中用1μL第一轮扩增产物的50倍稀释液作为模板，PCR扩增体系和反应程序与第一轮PCR相同；第二轮PCR产物即为转基因大豆BPS-CV127-9转化事件外源插入载体旁侧基因。

3.权利要求1所述的转基因大豆BPS-CV127-9转化事件外源插入载体旁侧基因在特异性定性检测大豆及相关产品是否含有BPS-CV127-9转化事件中的应用。