[发明专利]一种油菜种子RNA提取的方法

权利要求书

1.一种油菜种子RNA的提取方法，其特征在于包括下述步骤：

1）将热硼酸盐提取缓冲液预热至65℃；所述热硼酸盐提取缓冲液成分为：0.2M十水合硼酸钠，30mM乙二醇-双-(2-氨基乙醚)四乙酸，1%（w/v）十二烷基硫酸钠，1%（w/v）脱氧胆酸钠，10mM二硫苏糖醇,1%（v/v）酞菁氧钒,2%（w/v）聚乙烯吡咯烷酮；

2）100 mg油菜籽液氮速冻研磨成粉后加入1ml预热的上述提取缓冲液，继续研磨成匀浆；

3）将匀浆转至1.5ml离心管中，42℃恒温摇床孵育1.5h;

4)向上述匀浆中加入2M 氯化钾至终浓度160mM以沉淀蛋白，5000rpm，20min，4℃离心；

5）转移上清至新的离心管后，加入8M 氯化锂至终浓度2M，冰浴过夜；

6）次日，10000rpm，20min，4℃离心，弃上清，沉淀用预冷的2M氯化锂洗涤，10000rpm，15min，4℃离心，弃上清；

7）重复上述洗涤步骤2-3次；

8）沉淀溶解于250μl 1×TE缓冲液，10000rpm，15min，4℃离心以去除不溶杂质；

9）转移上清至新管中，加入1/10体积的2M 醋酸钾，pH5.5，冰浴15min后10000rpm，15min，4℃离心；

10）转移上清至新管，加入1/10体积的3M 醋酸钠，pH6.0；2.5倍体积的冰酒精、2μl肝糖，-80℃静置1-2h;

11) 13000rpm，15min，4℃离心，沉淀用70%酒精洗涤后，溶解于适量无RNase水中，-80℃保存备用。