[发明专利]抑制烟曲霉菌粘附角膜的Pc-E多肽

说明书

技术领域

本发明属于感染性眼病的生物防治技术领域，具体涉及抑制烟曲霉菌粘附角膜的多肽。

背景技术

角膜炎是眼部最常见的多发病，引起角膜炎的病原微生物包括真菌、细菌、病毒和棘阿米巴等。近年来，随着广谱抗生素和免疫抑制剂的滥用，以及角膜接触镜的普遍佩戴，角膜炎的发病几率大大增加。真菌性角膜炎多见于以农业人口为主的发展中国家，在我国有逐年增加的趋势，相关统计数据显示真菌性角膜炎在我国感染性角膜病中所占比例高达34.8％～61.9％，在部分地区已经成为角膜盲的首要原因。真菌性角膜炎常因感染菌属或菌株不明，对药物敏感性不一，治疗较为棘手。患者一旦诊治不够及时就有致盲的危险。所以，对角膜炎在发病初期进行有效的治疗是至关重要的。为此，开展真菌与角膜上皮细胞的相互作用研究，以期寻找可以更早、更快、更强阻断真菌感染进程的作用靶点，具有重要的临床意义。

病原菌的致病过程是其与宿主相互作用的结果。病原体、宿主细胞相互作用的研究常着眼于单一分子或少数分子，甚至在某些研究体系中仅观察到单个基因就判断为决定宿主对某病原体的敏感性的关键因素。但由于双方各自的复杂性和对对方的适应性，病原体-宿主间的相互作用处于动态的变化中。目前对于病原菌与角膜细胞的相互作用机制并不十分清楚。已知病原真菌和细菌粘附于宿主的角膜上皮细胞是角膜炎发生的首要步骤，这其中特异性配体-受体间的结合或非特异性的理化作用产生的粘附都发挥着重要作用，所以阻断这些粘附过程是防治角膜炎的一个很好的策略，将疾病控制在萌芽状态。

烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)作为最常见的真菌性角膜炎的致病菌种之一，其毒性较强，引发的病情发展迅速。但目前对于烟曲霉菌粘附角膜上皮细胞的具体机制还并不很清楚，因此对于如何在粘附阶段阻断烟曲霉菌感染角膜细胞的研究还处于起步阶段。

发明内容

本发明的目的是提供抑制烟曲霉菌粘附角膜的多肽，即可以更早、更快、更强阻断烟曲霉菌感染角膜的作用靶点，为感染性角膜病的临床治疗提供新的思路，以弥补现有技术的不足。

本发明利用人角膜上皮细胞对噬菌体展示的随机12肽文库进行三轮生物亲和淘筛，对所得的克隆大量扩增后，进行DNA的提取和序列测定，然后对所筛选的多肽进行人工合成，经ELISA方法进一步验证人工合成的肽段与人角膜上皮细胞的亲和力。接着利用细胞模型和器官模型研究合成肽段对烟曲霉菌与角膜上皮细胞相互作用的影响，从而验证多肽对感染性角膜病的防治效果。

本发明包括以下几个部分：

本发明的一个方面是提供抑制烟曲霉菌粘附角膜的多肽，包括有：

(1)序列分别为SEQ ID NO：1的多肽，

(2)与(1)中的多肽具有70％或以上同源性的多肽，该多肽的功能与(1)中的多肽功能相同或相似。

对于(2)中所述的多肽，可以是与(1)中的多肽具有75％同源性(3个氨基酸的不同)、80％以上同源性(2个氨基酸的不同)和90％以上同源性(1个氨基酸的不同)的多肽，该多肽的功能与(1)中的多肽功能相同或相似。

本发明的另一个方面是提供包含序列为SEQ ID NO：1多肽的融合多肽。所述的融合多肽可以是通过化学结合方法、酶切方法或物理断裂方法处理多肽片段所获得的。例如Pc-E多肽与抗原载体连接形成的蛋白复合体，抗原载体可以是卵清白蛋白(OVA)或牛血清白蛋白(BSA)。

本发明还提供一种多核苷酸，所述的多核苷酸是：

1)编码序列为SEQ ID NO：1多肽的核苷酸

2)编码与(1)中的多肽具有70％或以上同源性的多肽的核苷酸，所编码的多肽的功能与(1)中的多肽功能相同或相似。

所述的核苷酸为DNA或RNA，优选DNA。

本发明还提供一种药物组合物，包括序列为SEQ ID NO：1的多肽；所述的制品具有预防烟曲霉菌粘附角膜的功能。

本发明所提供的序列为SEQ ID NO：1的多肽用于制备抗体，制备的抗体应用在防治烟曲霉菌粘附角膜的药物中，同时制备的抗体还可以应用在检测烟曲霉菌的产品中。

本发明所筛选的多肽对烟曲霉菌与角膜上皮细胞的相互作用都有不同程度的竞争性抑制作用，可以特异性的阻断烟曲霉菌表面的配体与角膜上皮细胞受体的粘附，成为真菌性角膜炎治疗药物设计的新靶点，从而为其临床治疗提供新的思路。

附图说明

图1：本发明的多肽Pc-E与人角膜上皮细胞、角膜成纤维细胞和血管内皮细胞亲和力的ELISA检测效果柱状图；