[发明专利]一种酶法提高二亚油酰磷脂酰胆碱含量的方法

说明书

技术领域

一种酶法提高二亚油酰磷脂酰胆碱含量的方法，属于磷脂技术领域。

技术背景

富含亚油酸的磷脂酰胆碱(DLPC)具有重要的生物学功能，研究表明多烯磷脂(PPC)能有效预防和治疗肝脏疾病及肝脏纤维化，并可以预防动脉硬化引起的心血管疾病。PPC不仅影响肝脏纤维化过程，而且也可使已存在的肝脏纤维化回复，其原理是基于各种肝病均存在肝细胞膜与细胞线粒体超微结构损伤并伴磷脂丢失，细胞呼吸与能量合成不足这一中心环节，采取补充外源性磷脂使膜流动性与跨膜转运系统活性增强，受损的细胞膜因此得以恢复；S.Lieber研究发现，肝纤维化的患者几乎都患有B或C型肝炎，说明氧化应激和纤维化可以诱导C或B型肝炎的发生，PPC可以用来治疗B或C型肝炎，预防肝纤维化和降低转氨酶和胆红素的浓度。2007年S.Lieber等人研究了高脂肪食物引起的脂肪性肝炎的治疗效果。发现CYP2E1诱发氧应激产生大量的自由基是非酒精引起的脂肪性肝炎的主要原因，PPC具有较强的抗氧化作用，具有降低氧应激的功能。这方面进一步的研究认为PPC活性功能的发挥主要是DLPC的功能。

DLPC主要存在于大豆磷脂中，一般方法由大豆粉末磷脂分离得到的大豆磷脂酰胆碱(PC-90)，其DLPC含量在40％-50％。传统方法要更进一步提高DLPC的含量非常困难。通过文献检索国内外未发现通过酶法进一步提高PC-90中DLPC含量的文献报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种酶法提高DLPC含量的方法。以PC-90为原料通过酶法与亚油酸进行酸解反应，从而得到更高含量的DPLC产品。

本发明的技术方案：以大豆PC-90为原料，将原料、亚油酸和固定化脂肪酶加入到一定有机相中，进行酶法酸解反应，脱溶后通过氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的产物，离心回收固定化脂肪内，脱溶，丙酮洗涤后脱溶得到较高DLPC含量的产品。

(1)原料：以大豆醇溶性磷脂为原料，要求原料中磷脂酰胆碱含量大于或等于90％，其中DLPC的含量为40％-50％；

(2)所用的有机相溶剂可以是甲苯、氯仿或者正己烷；

(3)PC-90与亚油酸质量为1∶1-1∶10；

(4)固定化脂肪酶占总底物质量百分比为5％-35％，水分添加量占酶质量的百分比为0％-10％；

(5)所用的固定化脂肪酶可以是Lipozyme TL IM或Novozyme 435；

(6)反应温度为45℃-70℃，反应时间为12h-84h。

一种酶法提高二亚油酰磷脂酰胆碱含量的方法，所用的大豆PC-90原料来自于油厂油脂加工的副产品，并经进一步加工所得到的PC-90产品，其大豆PC含量大于或等于90％，PC-90中DLPC含量在40％-50％之间。通过将原料、亚油酸和固定化脂肪酶加入到一定有机相中，进行酶法酸解反应，脱溶后通过氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的产物，离心回收固定化脂肪酶，脱溶，丙酮洗涤后脱溶得到较高DLPC含量的产品。

本发明的有益效果：一种酶法提高二亚油酰磷脂酰胆碱含量的方法，为制备较高高纯度DLPC提供了一种可行的方法，使用该方法可以方便的制备在医药工业，脂质体工业及保健食品工业具有广泛用途的较高纯度DLPC产品。

表1.该方法所得产品指标

附图说明

本发明工艺框图。

具体实施方式

实施例1

将50gPC-90溶于100ml甲苯中，待完全溶化后加入56g亚油酸及添加有2％水的固定化脂肪酶Lipozyme TL IM 10.6g，混匀后于45℃条件下恒温水浴磁力搅拌(300rpm)24h，反应结束脱溶，加入氯仿-甲醇(2/1，V/V)提取目的产物，离心(4000rpm)回收固定化脂肪酶，脱溶，丙酮洗涤后脱溶，得到35.2克DLPC含量为60.4％(HPLC归一化法)的产品。

实施例2

将50gPC-90溶于184.2g亚油酸中，加入10ml氯仿，待完全溶解后加入添加有5％水的固定化脂肪酶Lipozyme TL IM 58.55g，混匀后于60℃条件下恒温水浴磁力搅拌(300rpm)48h，反应结束脱溶，加入氯仿-甲醇(2/1，V/V)提取目的产物，离心(4000rpm)回收固定化脂肪酶，脱溶，丙酮洗涤后脱溶，得到28.2克DLPC含量为60.9％(HPLC归一化法)的产品。

实施例3

将50gPC-90溶于166ml正己烷中，待完全溶解后加入111g亚油酸，加入添加有6％水的固定化脂肪酶Novozyme 435 32.2g，混匀后于55℃条件下恒温水浴磁力搅拌(300rpm)36h，反应结束后脱溶，加入氯仿-甲醇(2/1，V/V)提取目的产物，离心(4000rpm)回收固定化脂肪酶，脱溶，丙酮洗涤后脱溶，得到25.3克DLPC含量为61.1％(HPLC归一化法)的产品。