[发明专利]用于蛋白悬浮芯片检测的血清样品处理制剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种血清样品的处理制剂，尤指一种用于蛋白悬浮芯片检测的血清样品处理制剂。

背景技术

随着全球生物安全战略的广泛实施，针对病原生物的快速诊断需求明显增加，像经典的检测方法如检测核酸的各类PCR、原位杂交、DNA芯片、NASBA等技术，检测蛋白质等抗原、抗体物质的ELISA、免疫层析技术、蛋白芯片技术等，都具有各自的特点。但是一般的方法主要检测单种病原或传染病，面对一个感染者，难以实现多病因的同时筛查。

悬浮芯片检测的基本原理是利用聚苯乙烯(polystyrene)所制作的微球，包覆不同比例的红色和橙色两种荧光染料，当微球被635nm的激光照射后，发射658nm和712nm的荧光。比较二者发射光的比率，能够区分100种不同的荧光微球，而产生100种不同比例颜色，作为100种独特的色彩编号，每颗微球大小约5.6μm，可依不同研究目的如免疫分析、核酸研究、酶分析、受体和配体识别分析等，并根据不同研究目的而标定特定抗体、核酸探针及各种受体探针。标记探针的微球与待测物在96孔板中进行反应。检测通道中设有两道激光，一道识别微球分类编码以确定检测项目；一道记录荧光信号强弱以检测待测物的含量。当待测样本与特定微球的探针吸附在一起时，两道激光所激发的光都可被检测到。而若样本中不含该标的物，则仅有微球中的激发光可被检测到。再通过机器与计算机自动统计分析两道激光所激发的微球种类与信号强弱，判定待测样本中有几种测试目标物在其中，从而得知测试样本中有无待测病原存在，或同时存在有几种至数十种病原。

采用蛋白悬浮芯片进行检测时，其检测对象主要可分为抗原和抗体两大类，目前，应用蛋白悬浮芯片检测蛋白质时多是用抗体包被微球然后检测体液中的细胞因子或是抗原，但是在检测不同的抗原时需要选择不同的抗体，由此就增加了实验的繁琐程度。如果用抗原包被微球，进而检测血清中的抗体就可简化实验，易于操作。但是，由于血清中的抗体成分种类复杂繁多，用抗原包被的微球检测抗体常常出现严重的非特异性吸附现象，严重影响检测敏感性，因此，采用悬浮芯片检测血清时需要制备一种能有效降低血清中非特异性吸附的样品处理制剂。

蛋白悬浮芯片用于检测抗体的原理基于免疫学中抗原抗体的特性性反应，在免疫学中用于检测抗体的方法有酶联免疫吸附剂测定(ELISA)间接法中测抗体时，所用的血清样本处理液为PB或PBS溶液，将PB或PBS溶液用于悬浮芯片检测的血清样本处理液时，非特异性吸附较严重，易出现假阳性和弱阳性，主要是由于人血清中含有约40％以上的异嗜性抗体，易与微球发生非特异性吸附，从而导致假阳性和弱阳性的现象。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可减少待测血清样品中非特异性吸附的样品处理制剂，尤其是用于蛋白悬浮芯片检测的样品处理中，由此提高蛋白悬浮芯片检测的灵敏度，而且该血清样品处理制剂的原料来源容易，配制方法简便。

为达到上述目的，本发明提供一种用于蛋白悬浮芯片检测血清抗体的样品处理制剂，其特征在于：该制剂包括基础缓冲液、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，其中，该基础缓冲液的pH值在5.5-9.0之间，聚乙烯醇的质量体积百分比含量在0.05％-1.5％(即0.5-15毫克/毫升)之间，聚乙烯吡咯烷酮的质量体积百分比含量在0.05％-2.0％(即0.5-20毫克/毫升)之间。

本发明所述的血清样品处理制剂进一步含有所属技术领域常用的封闭剂，例如，所述封闭剂可选自BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、赖氨酸等中的一种或多种。

本发明所述的血清样品处理制剂进一步包括所属技术领域的常用防腐剂，所述防腐剂例如是：叠氮钠、硫汞撒或庆大霉素。

本发明的处理制剂中的基础缓冲液可以为生物化学中常用的缓冲液或盐溶液，例如，可选自Tris缓冲液、Hepes缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液等中的一种或几种的混合液。

本发明所述的样品处理制剂还可以含有高分子表面活性剂，其选自海藻酸钠、甲基纤维素、聚维酮等中的一种或多种。

本发明的样品处理制剂中包括特定含量的高分子表面活性剂聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮，因此可有效的降低血清样品中的非特异性吸附，使之在经过简单处理后适用于悬浮芯片检测，从而提高悬浮芯片分析方法检测血清样品的能力。另外，本发明优化了所述制剂中的聚乙烯醇和聚乙烯吡咯酮的浓度、基础缓冲液pH值，适用于蛋白悬浮芯片的血清检测。