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[发明专利]多发性骨髓瘤耗竭性NK细胞亚群、其特征基因及其应用-CN202210035441.X在审
发明人：侯健;李昕;陈梦萍 -专利权人：上海交通大学医学院附属仁济医院
申请日： 2022-01-13 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明涉及肿瘤分子生物学领域，具体是多发性骨髓瘤耗竭性NK细胞亚群、其特征基因及其应用。本发明利用单细胞转录组测序分析技术，对多发性骨髓瘤患者与健康人外周血、骨髓来源的NK细胞进行单细胞转录组测序，鉴定出一群多发性骨髓瘤特异性NK细胞亚群，即耗竭性NK细胞亚群，并确定了耗竭性NK细胞表达的特征基因ZNF683，所述特征基因能够用于识别或鉴定来自多发性骨髓瘤的耗竭性NK细胞，进一步用于多发性骨髓瘤的辅助诊断、预后判断及免疫治疗，以及提供相关的检测试剂。
多发性骨髓瘤耗竭 nk 细胞特征基因及其应用

[发明专利]一种可募集并激活NK细胞的CAR T细胞及应用-CN202211118103.9在审
发明人：王磊 -专利权人：北京多能赛尔生物科技有限公司
申请日： 2022-09-15 - 公布日： 2022-11-04 - 主分类号： C07K16/46 文献下载
摘要：本发明提供了一种可募集并激活NK细胞的CART细胞及应用，涉及生物医药技术领域。本发明所述双特异性抗体，一端可结合到肿瘤细胞，另一端可结合并募集NK细胞。同时启动CART细胞和NK细胞对肿瘤细胞的杀伤。利用CART技术特异性靶向，在肿瘤组织周围募集并激活NK细胞，发挥其杀肿瘤作用，CART细胞和NK细胞相互结合互相促进，达到杀灭肿瘤细胞的作用。本发明所述CART细胞，可在肿瘤组织中产生局部大量的抗体，募集并激活NK细胞，从而对肿瘤细胞产生特异性杀伤。
一种募集激活 nk 细胞 car 应用

[发明专利]一种检测CTC抵抗NK细胞杀伤的试剂盒及其应用-CN202310079684.8在审
发明人：郭玮;王蓓丽;杨文静;孙云帆 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2023-01-17 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测CTC抵抗NK细胞杀伤的试剂盒及其应用。本发明基于RNA‑seq技术结合QRT‑PCR技术检测发现，血小板可上调CTC表面CD155表达；通过体内实验，进一步发现CD155高表达促进肝癌细胞免疫逃逸，NK细胞的功能下降，且杀伤能力减弱。因此，本发明提出一种通过直接检测CTC上粘附性的血小板以及CTC表面CD155表达，而无需将NK细胞及肿瘤细胞共培养，即可评估CTC抵抗NK细胞杀伤的能力的试剂盒。本发明试剂盒可用于直接检测免疫逃逸型CTC，尤其是检测逃避NK细胞杀伤的CTC，通过对CTC上CD155染色即可进行评估，无需与NK细胞共培养，大大减少了试剂成本及操作时间。
一种检测 ctc 抵抗 nk 细胞杀伤试剂盒及其应用

[发明专利]CAR-NK细胞联合心脏生理性肥大药物的用途-CN202310837952.8在审
发明人：霍云龙;首健 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2023-07-10 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： A61K39/00 文献下载
摘要：本发明涉及CAR‑NK细胞联合心脏生理性肥大药物在制备治疗缺血相关的心脏疾病的药物中的用途。其中公开了可清除组织纤维化的CAR‑NK细胞的制备，还公开了AAV、LNP或VLP介导的心脏生理性肥大药物的制备；以及它们对缺血性心脏病相关疾病进行联合治疗。CAR‑NK细胞为靶向FAP或CD248的CAR‑NK细胞，缺血相关的心脏疾病包括急性或慢性心肌缺血、心肌梗死、冠心病、扩张型心肌病、HFrEF等所有与心肌缺血有关的心脏病。实验结果表明，CAR‑NK细胞的存活时间、增殖能力、杀伤能力显著增强，CAR‑NK细胞联合心脏生理性肥大药物使梗死面积占比减少，可更好的治疗多种缺血相关的心脏疾病。
car nk 细胞联合心脏生理肥大药物用途

[发明专利]基于分层路网的路径搜索方法和装置-CN201110006188.7有效
发明人：李楷;马海波;黄跃峰;李少杰 -专利权人：北京超图软件股份有限公司
申请日： 2011-01-13 - 公布日： 2011-06-01 - 主分类号： G06F17/30 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于分层路网的路径搜索方法和装置，所述方法包括：在下层路网分别在预设范围内搜索起点S的局部最优路径RSJ＝(S...Ji)和终点E的局部最优路径RNE＝(Nk...E)；所述节点Ji和节点Nk为上层路网节点；在上层路网搜索节点Ji和节点Nk的局部最优路径RJN＝(Ji...Nk)；合并上述局部最优路径，获得从起点S到终点E的最优路径RSE＝(S...Ji...Nk...E)。本发明方案中，起点和终点的局部最优路径通过预设范围控制路网搜索规模；远距离的节点Ji和Nk之间的最优路径在路网规模较小的上层路网进行搜索，从而使得总体搜索规模在较小的可控范围内进行，路径搜索效率大大提高
基于分层路网路径搜索方法装置

[发明专利]无饲养层体外扩增原代NK细胞的培养组合物及其应用-CN201810419218.9有效
发明人：不公告发明人 -专利权人：北京中灜壹通生物科技有限公司
申请日： 2018-05-04 - 公布日： 2019-03-29 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供了一种无饲养层体外扩增原代NK细胞的培养组合物及其应用，同时涉及所获得的NK细胞及相关应用。本发明提供了一种用于培养NK细胞的组合物，该组合物包括活化培养基组合物和/或扩增培养基组合物，活化培养基组合物包括活化基础培养基、rhIL‑2、rhIL‑15、rhIL‑21、OK432、OKT‑3、以及本发明的技术提高了体外NK的制备效率，降低了制备成本；并提高了终产品的NK纯度，获得的NK细胞具有更好的生物学活性。
活化培养基基础培养基扩增培养基培养组合物体外扩增饲养层制备应用生物学活性活化扩增体外

[发明专利]自然杀伤细胞体外纯培养的方法-CN201910033242.3有效
发明人：魏君;蔡萌 -专利权人：武汉睿健医药科技有限公司
申请日： 2019-01-14 - 公布日： 2020-06-16 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种自然杀伤细胞体外纯培养的方法，其包括如下步骤：采集外周血，分离单个核细胞，采用结合有特异性抗体的磁珠去除非NK细胞，得NK细胞群；将NK细胞群置于多重抗体包被的培养瓶中采用包含IL‑2、IL‑7、IL‑15、anti‑CD16、OK432以及灭活的自体血清的完全培养基进行激活培养，得激活的NK细胞群；将激活的NK细胞群置于无抗体包被的培养瓶中继续进行扩增培养，即得。该方法不使用任何异源血清成分和滋养层细胞，能够整体上取得较高的扩增效率，同时使扩增后的NK细胞纯度达90％以上，实现了体外高效纯培养，便于满足临床使用。
自然杀伤细胞体外培养方法

[发明专利]脂肪干细胞诱导分化为自然杀伤细胞的方法及用途-CN201210375513.1有效
发明人：辛钟成;宁红秀;吕福泰;林桂亭;郭应禄 -专利权人：北京东方百奥医药开发有限公司
申请日： 2012-09-29 - 公布日： 2018-11-02 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及一种脂肪干细胞诱导分化为NK细胞的方法，其包括以下步骤：将脂肪干细胞诱导分化为造血干细胞前体细胞；将造血干细胞前体细胞进一步诱导分化为NK细胞，其特征在于，在诱导分化过程中，将E4BP4基因转染入造血干细胞前体细胞本发明还涉及利用本发明的方法制备得到的NK细胞，以及所述的NK细胞用于制备预防和/或治疗恶性肿瘤的组合物或药物的用途。本发明制备的NK细胞对恶性肿瘤细胞具有很强的细胞毒性和特异性。由于脂肪干细胞来源丰富，且不受伦理和法律的约束，因此本发明的制备NK细胞的方法在临床中有很好的应用前景。
脂肪干细胞诱导化为自然杀伤细胞方法用途

[发明专利]联合制备CAR-NK细胞和CAR-NKT细胞的方法-CN201610821268.0有效
发明人：盖丽云;李香群;李刚毅 -专利权人：北京多赢时代转化医学研究院
申请日： 2016-09-13 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种联合制备CAR‑NK细胞和CAR‑NKT细胞的方法，该方法包括以下步骤：1)将外周血单个核细胞加入细胞培养基中，预活化其中的NK细胞和NKT细胞，再选择性体外活化扩增NK细胞和NKT细胞该方法使用健康供者的NK和NKT可以进行标准化和批量化制备；另外本申请中NK细胞和NKT细胞的纯度无需纯化即可分别达到60％和30％以上，因此可以避免预先纯化；使用该方法联合制备的CAR‑NK细胞和CAR‑NKT
联合制备 car nk 细胞 nkt 方法

[发明专利]与NK/T细胞淋巴瘤的过度炎症反应相关的突变位点及应用-CN201711223787.8有效
发明人：刘强;文海军;马华娟;雷鑫星;何斌;王自峰 -专利权人：中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）;中山大学附属第三医院
申请日： 2017-11-29 - 公布日： 2021-05-25 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了与NK/T细胞淋巴瘤的过度炎症反应相关的突变位点及应用，属于医学检测领域。申请人首次发现NF‑κB信号通路中进化保守的接头蛋白ECSIT基因在约20％的NK/TCL患者中都存在V140A的突变，并进一步利用收集丰富的NK/TCL临床样品和病例资料做进一步验证，揭示了ECSIT基因V140A突变激活NF‑κB信号通路诱导炎症反应的作用和机制，并检测靶向ECSIT对NK/TCL的潜在疗效，大规模临床样本分析表明ECSIT突变与肿瘤生存及预后的相关性。本发明研究成果为NK/T细胞淋巴瘤辅助诊断或肿瘤治疗/预后评估提供理论基础，为改善NK/TCL的治疗效果提供新的突破口。
nk 细胞淋巴瘤过度炎症反应相关突变应用

[发明专利]一种CAR-NK细胞及其制备方法与应用-CN201710626029.4有效
发明人：王旭;李陶;林词雄;林洁璇;朱刚 -专利权人：沃昕生物科技（深圳）有限公司
申请日： 2017-07-27 - 公布日： 2020-07-03 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种CAR‑NK细胞及其制备方法与应用，包括：S1：合成CAR序列；S2：将其整合进慢病毒目的载体质粒中，得到目的质粒；S3：将目的质粒与293T细胞混合并进行培养，收集病毒液，浓缩，得目的质粒的病毒浓缩液；S4：收集自体血浆以及外周血单个核细胞PBMC，用活化培养基调整细胞密度并进行细胞培养；转移到新的细胞培养袋中继续培养，并补充增殖培养基；培养完毕后得到NK细胞；S5：在NK细胞中加入目的质粒的病毒浓缩液进行孵育，得到CAR‑NK细胞。本发明的CAR‑NK细胞具有非常强的因子分泌能力和抑瘤能力，且制备CAR‑NK细胞的转染方法高效、稳定。
一种 car nk 细胞及其制备方法应用

[发明专利]NK细胞无血清培养液及NK细胞的培养方法-CN202011014056.4有效
发明人：崔兴日;吴俊昌;陈业祖;孙晓 -专利权人：深圳市一五零生命科技有限公司
申请日： 2020-09-24 - 公布日： 2021-01-19 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种NK细胞无血清培养液及NK细胞的培养方法，该无血清培养液包括基础培养液、促生长组分、酶抑制剂、微量元素和微支撑体，在该培养液中不含牛血清白蛋白，在培养NK细胞之后，纯化过程简单，并且避免动物蛋白引起人体免疫反应；同时在无血清培养液中具有微支撑体，且具有促进贴壁生长的昆布氨酸和多聚赖氨酸，能够提高NK细胞的扩增速度；在培养基中加入微量元素锌能够提高抗体表达量，也可以抑制细胞的凋亡；铜也可以提高抗体表达量。本发明的培养液能够实现对NK细胞培养的高效培养，并且能够提高NK细胞对肿瘤的杀伤能力。
nk 细胞血清培养液培养方法

[发明专利]一种体外扩增I型天然细胞毒性淋巴细胞ILC1/NK的方法-CN201810325473.7有效
发明人：方昌阁 -专利权人：平安爱普德（北京）生物技术有限公司
申请日： 2018-04-12 - 公布日： 2022-04-19 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外扩增I型天然细胞毒性淋巴细胞ILC1/NK的方法。本发明提供了一种体外扩增ILC1/NK细胞的方法，为用破骨细胞作为滋养层，联合使用抗CD16抗体和白介素‑2扩增ILC1/NK细胞。本发明的实验证明，本发明的方法活化扩增的ILC1/NK细胞同时具有很强的分泌干扰素γ和裂解杀伤肿瘤干细胞的功能，其裂解杀伤肿瘤干细胞例如MiaPaCa‑2的能力比不使用滋养层法、使用辐射的外周血单核细胞(PBMC)方法扩增获得的ILC1/NK细胞、以及癌细胞系NK92细胞(ATCC，CRL‑2407)等的能力平均高18倍左右。
一种体外扩增天然细胞毒性淋巴细胞 ilc1 nk 方法

[发明专利]一种跨越血脑屏障和特异性靶向脑胶质瘤治疗药物的投递系统的制备方法-CN201911128402.9有效
发明人：蔡林涛;邓冠军;孙枝红;龚萍 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2019-11-18 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： A61K47/69 文献下载
摘要：本发明公开了一种跨越血脑屏障和特异性靶向脑胶质瘤治疗药物的投递系统的制备方法，包括以下步骤：步骤1)NK细胞膜的制备：将NK细胞加入含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解缓冲液中，经过超声离心处理，得到NK细胞膜；步骤2)将1,2‑二硬脂酰基‑sn‑甘油基‑3‑磷酸乙醇胺‑N‑[氨基(聚乙二醇)2000](铵盐)和药物加入纯水中，超声，获得脂质体纳米颗粒；步骤3)通过220nm孔径的聚碳酸酯膜将NK细胞膜和脂质体纳米颗粒共挤压形成NK细胞仿生纳米载体，本发明制备得到的NK细胞仿生纳米载体是一种跨越血脑屏障和特异性靶向脑胶质瘤治疗药物的投递系统。
一种跨越血脑屏障特异性靶向胶质治疗药物投递系统制备方法

[发明专利]A－NK细胞分离培养方法-CN200410043612.5无效
发明人：王志华 -专利权人：哈尔滨医科大学肿瘤病防治研究所
申请日： 2004-06-09 - 公布日： 2005-12-14 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：A－NK细胞分离培养方法是一种医学肿瘤生物治疗学的方法。用如下方法对A－NK细胞分离培养进行了改进。用苯丙氨酸甲酯(PME)去除单核巨噬细胞而不改变淋巴细胞的表型和细胞毒性；在A－NK细胞培养方法的改进中，无血清培养基可替代含血清的完全培养基，二者所得培养物的数目和功能相当，发展无血清培养基用于A－NK细胞的临床生物治疗，即不减少A－NK细胞的数量和活性，又能增加其临床应用的安全性；IL－4可联合IL－2对A－NK细胞的生长有较强的刺激或成熟作用；IL－2和IL－12联合应用可提高活化免疫细胞的杀伤活性
nk 细胞分离培养方法