本发明公开了一种突变的烤烟CYP82E4基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,与野生型的CYP82E4基因相比较,突变位点为:第116位的核苷酸由G突变为A。本发明还公开了该突变基因所编码的蛋白质,如SEQ ID NO.4所示。经研究表明,本发明的突变的烤烟CYP82E4基因,导致烟碱去甲基化酶的表达或功能降低,从而抑制了成熟叶片内烟碱去甲基酶的活性,使得含有该突变基因的烟草植株中的降烟碱含量显著降低。因此,该突变的烤烟CYP82E4基因可用于筛选降烟碱含量低的烟草品种的育种与选育工作:含有该突变基因的烟草植株自交,或与其他烤烟杂交进行常规选育,可获得降烟碱含量低的烟草品种。
本发明提供了一种CYP2D6*10基因的SYBR Green I检测引物、试剂盒及检测方法,其中检测引物包括CYP2D6*10野生型上游引物、CYP2D6*10突变型上游引物、CYP2D6*10野生型和CYP2D6*10突变型通用下游引物,所述CYP2D6*10野生型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,CYP2D6*10突变型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示,通用下游引物核苷酸序列如
本发明专利提供了新月弯孢霉甾体C14α‑羟化酶突变体Y10(S129A/T130A/D131G/T132L/V133I/R134K/S135K)、D131G,其编码核苷酸序列如SEQ ID NO:4、SEQ同C14α‑羟化酶CYP5103B5相比,突变体Y10(S129A/T130A/D131G/T132L/V133I/R134K/S135K)、D131G转化甾体底物孕酮的特异性明显提高,副产物明显减少。本发明专利还提供了涉及CYP5103B5突变体异源过表达的表达载体及其甾体转化工艺,为研究开发高效孕酮C14α‑羟化生产工艺提供了宝贵材料(基因和菌种)和基础数据支撑。