本发明涉及沉默人的CDT1基因的siRNA，其具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3的任一序列。本发明还提供了含上述沉默人的CDT1基因的siRNA重组载体以及含上述沉默人的CDT1基因的siRNA、重组载体的用途。本发明提供的沉默人的CDT1基因的siRNA、重组载体可为人的CDT1基因功能的研究提供有效技术工具。
本发明公开一种副猪嗜血杆菌CDT三顺反子及重组CDT的制备方法。本发明首先公开了一种副猪嗜血杆菌CDT三顺反子，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本发明进一步公开了副猪嗜血杆菌重组CDT的制备方法。本发明建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT的制备方法，利用副猪嗜血杆菌三个亚基之间天然的基因间隔区序列，构建不含信号肽编码序列的CDT三顺反子，克隆到载体中构建不含信号肽编码序列的三顺反子重组质粒，实现了三个亚基在同一重组大肠杆菌菌株中的同步表达及同步纯化，简化了重组CDT的制备过程，所制备的重组CDT具有良好的生物学活性，为下一步精确研究副猪嗜血杆菌CDT生物学功能奠定了基础。
本发明提供了高活性的mTET2酶突变体，mTET2CDT和mTET2CDTm。mTET2CDT是在野生型mTET2氨基酸序列(Uniprot：Q4JK59‑1)中，只保留1042‑1347和1747‑1848两个结构域的氨基酸序列，中间用GGGGS来进行连接得到的融合蛋白，其氨基酸序列如mTET2CDTm在mTET2CDT的基础上进行了V1307L和V1309C点突变，其氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，编码DNA序列如SEQ ID No.2所示。mTET2CDT和mTET2CDTm显著提高了mTET2的氧化活性。此外，mTET2CDTm还提高了氧化5mC过程中5hmC中间产物的占比。
