本发明涉及一种用于大肠杆菌‑鸭疫里默氏杆菌的高效穿梭质粒、制备方法及其应用，穿梭质粒的基因序列如SEQ ID NO.1所示，是在质粒pPM5的基础上进行改造的，先将鸭疫里默氏杆菌复制起始基因(pRA0726 ori)克隆到此质粒中，然后将转移位点(oriT)克隆到上述质粒中，使此穿梭质粒能够通过高效的结合转移导入鸭疫里默氏杆菌中，且能稳定的复制。为了方便基因片段插入穿梭质粒上且提高基因的表达量，将在穿梭质粒上克隆一段带有多个内切酶位点的高表达启动子序列(High EXP)。本发明所得穿梭质粒可以在鸭疫里默氏杆菌中稳定存在，用于基因敲除株的回补。质粒较小且具有多个多克隆位点，易于操作。结合转移效率非常高。
本发明提供了一种特异于禽类原始生殖细胞的基因转移系统和方法。该基因转移系统包括含有具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的vasa启动子的转座酶辅助质粒。该基因转移方法包括：(1)使用生物工程方法，构建含有vasa启动子或者含有vasa启动子和通用增强子元件的转座酶辅助质粒；(2)使用生物工程方法，构建含有需要转移的目的基因表达盒的转座子供体质粒；(3)提取质粒后，将上述转座子供体质粒和转座酶质粒按1:2比例混合均匀，调整其终浓度为500ng—1.5μg/μL；(4)将步骤(3)中所得的混合质粒使用包埋剂包裹后，转染禽类早期胚胎血液中PGCs细胞。
