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[发明专利]重组人源Ⅲ型胶原蛋白α1链及其应用-CN201910088754.X在审
发明人：梁亮;王丽萍 -专利权人：江苏悦智生物医药有限公司
申请日： 2019-01-29 - 公布日： 2019-07-09 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人源III型胶原蛋白α1链及其应用，编码该所述重组人源III型胶原蛋白α1链的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述重组人源III型胶原蛋白α1链从氨基端依次包含：氨基端亲和纯化标签、人源III型胶原成熟肽链以及羧基端亲和纯化标签。根据本发明实施例的重组人源III型胶原蛋白，通过在人源III型胶原成熟肽链的两端都设计有特异性亲和纯化标签，有利于全长蛋白的纯化，也可用于胶原蛋白的鉴定，并且根据本发明实施例的所述重组人源III型胶原蛋白采用的是III型胶原蛋白的成熟肽链，去除了两端的前肽，表达量远高于包含前肽的基因。
人源蛋白亲和纯化成熟肽胶原蛋白标签氨基端前肽核苷酸序列全长蛋白表达量羧基端可用应用基因

[发明专利]SARS主蛋白酶的表达和纯化方法-CN202010901715.X在审
发明人：李健;熊兵 -专利权人：深圳晶蛋生物医药科技有限公司
申请日： 2020-08-31 - 公布日： 2020-11-24 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明公开了SARS主蛋白酶的表达和纯化方法，步骤有：构建并转化表达质粒；取菌液到含有50μg/ml Kan+抗生素的LB液体培养基中，在摇床上培养过夜；加入IPTG，诱导培养；菌液离心，在重悬缓冲液中重悬；破碎离心，取上清镍柱纯化，不同咪唑浓度的洗脱液进行洗脱，将含有SARS主蛋白酶的洗脱液，进行透析得到目的蛋白。本发明的优点有：利用大肠杆菌蛋白表达系统可在短时间内获得大量SARS主蛋白酶，通过特殊的纯化方法可获得纯度高、稳定性好的SARS主蛋白酶。整个SARS主蛋白酶蛋白表达和纯化过程耗费成本低、操作简单、可重复性高，可投入大量生产过程。
sars 蛋白酶表达纯化方法

[发明专利]一种类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白及其制备方法和应用-CN201510124638.0有效
发明人：孙怀昌;吴倩;张鑫宇;夏晓莉 -专利权人：扬州大学
申请日： 2015-03-20 - 公布日： 2017-11-14 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白及其制备方法和在重组腺病毒浓缩和纯化中的应用。所述类弹性蛋白多肽(ELP)与柯萨奇腺病毒受体(CAR)融合蛋白(ELP‑CAR)，由ELP、间隔区和CAR‑D1区组成。其制备方法包括类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合表达载体的构建、融合蛋白的表达与纯化以及重组腺病毒的纯化与洗脱。与其他方法相比，用本发明的类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白浓缩和纯化重组腺病毒具有简单、快速和经济等优点，制备的重组腺病毒可以用于动物实验研究和基因工程疫苗。
种类弹性蛋白多肽柯萨奇腺病毒受体融合及其制备方法应用

[发明专利]一种内含肽介导的对重组蛋白定点聚乙二醇修饰的方法-CN201510219701.9有效
发明人：刘海峰;王怡;刘沙 -专利权人：武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2015-05-04 - 公布日： 2018-04-13 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种内含肽介导的对重组蛋白进行定点聚乙二醇修饰的方法，该方法包含1、合成重组蛋白基因片段；2、构建重组蛋白基因‑GyrA融合基因片段，并在GyrA基因C端加纯化标签，通过双酶切构建入表达载体中，并导入宿主细胞；3、发酵宿主细胞获得包含重组蛋白、内含肽和纯化标签的融合蛋白产物；4、在聚乙二醇(PEG)修饰物NH2‑PEG‑COOH的氨基端合成加入一个半胱氨酸(Cys)，得到PEG活化修饰物；5、纯化步骤3所得的融合蛋白产物，用切割液于4℃进行切割；6、加入PEG活化修饰物进行PEG修饰；7、纯化PEG修饰的重组蛋白。本发明制备的PEG修饰蛋白，成分均一，纯度高，活性损失小。
一种内含肽介导重组蛋白定点聚乙二醇修饰方法

[发明专利]重组人源III型胶原蛋白α1链及其应用-CN201911093124.8有效
发明人：钱松;王丽萍 -专利权人：江苏悦智生物医药有限公司
申请日： 2019-11-11 - 公布日： 2021-02-26 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人源III型胶原蛋白α1链及其应用，编码该所述重组人源III型胶原蛋白α1链的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述重组人源III型胶原蛋白α1链从氨基端依次包含：氨基端亲和纯化标签、人源III型胶原成熟肽链以及羧基端亲和纯化标签。根据本发明实施例的重组人源III型胶原蛋白，通过在人源III型胶原成熟肽链的两端都设计有特异性亲和纯化标签，有利于全长蛋白的纯化，也可用于胶原蛋白的鉴定，并且根据本发明实施例的所述重组人源III型胶原蛋白采用的是III型胶原蛋白的成熟肽链，去除了两端的前肽，表达量远高于包含前肽的基因。
重组 iii 胶原蛋白及其应用

[发明专利]一种梨PMEI蛋白体外表达的方法及其应用-CN202010041241.6有效
发明人：吴巨友;朱晓璇;汤超;王鹏;张绍铃 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-01-15 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种梨PMEI蛋白的体外表达纯化方法及其应用。通过设计引物克隆梨PMEI基因；构建大肠杆菌重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF；将构建的重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中，构建梨PMEI蛋白重组表达菌株；对重组菌株进行蛋白诱导表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PMEI蛋白；之后，用获得的重组梨PMEI蛋白处理梨花粉管及拟南芥根部。通过本发明的方法，实现了梨PMEI蛋白的首次体外表达及纯化，表达效率高，纯化蛋白稳定存在且纯度完全可以满足相关实验的需要；通过重组梨PMEI蛋白对梨花粉管和拟南芥根部的处理，促进了梨花粉管和拟南芥根部的生长
一种 pmei 蛋白体外表达方法及其应用

[实用新型]一种深层过滤系统及抗体药品纯化装置-CN202321020427.9有效
发明人：肖鹏;王钦辉;陈茂林 -专利权人：东曜药业有限公司
申请日： 2023-04-28 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： B01D61/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种深层过滤系统及抗体药品纯化装置，深层过滤系统包括驱动件、深层过滤件以及导流元件，导流元件上设有UV传感器，UV传感器设置在深层过滤件的下游方向。此结构的深层过滤系统，通过驱动件驱动抗体蛋白样品液的流通，导流元件导流抗体蛋白样品液至深层过滤件，通过深层过滤件过滤截留HCP，以降低抗体蛋白样品液内HCP的浓度，由UV传感器检测经深层过滤后抗体蛋白样品液内的目标蛋白浓度，使深层过滤系统在目标蛋白浓度满足需求时进行后续收集工作，以获取有效的纯化抗体蛋白药液。本实用新型优化了过滤纯化结构，具有快速获得所需的抗体蛋白药液，纯化效率高的优点。
一种深层过滤系统抗体药品纯化装置

[发明专利]一种从抗虫棉种子中纯化Bt毒蛋白的方法-CN201310070417.0有效
发明人：王保民;张亮;曹振;郭素琴;谭桂玉;南铁贵;李召虎 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2013-03-06 - 公布日： 2013-06-12 - 主分类号： C07K14/325 文献下载
摘要：本发明公开了一种从抗虫棉种子中纯化Bt毒蛋白的方法。本发明提供的从抗虫棉种子中纯化Bt Cry1Ac蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将抗虫棉种子去壳后进行可溶性总蛋白的提取，得到溶液甲；（2）将所述溶液甲进行60%饱和度的硫酸铵沉淀，离心收集沉淀；（3）溶解步骤（2）得到的沉淀并进行透析，得到溶液乙；（4）将所述溶液乙进行免疫亲和层析，收集与抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体特异结合的蛋白组分，即为Bt毒蛋白；所述抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体为是由杂交瘤本发明具有以下优点：（1）简化了纯化流程，降低了纯化成本；（2）缩短了纯化时间，减少了目的蛋白损失。
一种抗虫棉种子纯化 bt 蛋白方法

[发明专利]猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用-CN202110426900.2有效
发明人：魏衍全;张勇;成述儒;武小椿;任丽君 -专利权人：甘肃农业大学
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2023-01-03 - 主分类号： C07K14/57 文献下载
摘要：本发明提供了猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用，属于生物基因工程领域。该方法包括的步骤有：⑴FeIFN‑γ蛋白的信号肽序列和理化性质分析；⑵原核表达质粒pET28a‑SUMO‑FeIFN‑γ的构建；⑶含重组质粒的BL21细菌的诱导表达与重组蛋白的可溶性分析；⑷SUMO‑FeIFN‑γ融合蛋白最佳表达条件的筛选；⑸SUMO‑FeIFN‑γ融合蛋白的大量表达和纯化；⑹SUMO‑FeIFN‑γ融合蛋白的酶切和纯化。本发明克隆不包含信号肽的成熟蛋白基因序列，构建了原核表达质粒，并转化BL21感受态细胞进行表达和纯化，使用了带有SUMO助溶标签的pET28a‑SUMO表达载体，从而实现了目的蛋白的可溶性表达，外源蛋白的可溶性表达水平高，具备很高的生物学活性，纯化步骤简便，为后期抗病毒药物的开发奠定了基础。
干扰素可溶性表达纯化方法应用

[发明专利]一种重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白的表达和纯化方法-CN201610036535.3在审
发明人：鲁帅尧;张莹;李鸿钧;马开利;陈瑜;和占龙;吴正存;马进;胡婧雯;柳光龙 -专利权人：中国医学科学院医学生物学研究所
申请日： 2016-01-20 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供一种含有重组人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)融合蛋白的表达和纯化方法，表达过程，所述融合蛋白为GST蛋白与重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白，构建成带GST标签质粒后转入BL21，IPTG诱导表达，以包涵体形式大量表达，纯化以离子交换层析柱和GST亲和柱两步，得到量大且纯度高的蛋白。本发明的有益效果是选用GST系统表达hFGF21蛋白，通过诱导条件的优化大幅度提高了蛋白表达量；经过离子交换柱层析纯化和GST亲和柱二次纯化，不仅可尽量减小蛋白的损失，还可有效提高蛋白纯度；对hFGF21蛋白的成药性开发具有重要的现实意义。
一种重组纤维细胞生长因子 21 融合蛋白表达纯化方法

[发明专利]一种牛乳中β-酪蛋白的纯化制备方法-CN201910902739.4在审
发明人：梁鑫淼;叶贤龙;钱子俊;郭志谋;肖思佳;闫竞宇 -专利权人：泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司
申请日： 2019-09-24 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明公开了一种牛乳中β‑酪蛋白的纯化制备方法，包括a)样品预处理：采用低温离心去脂和等电点沉淀除去乳清蛋白，得酪蛋白粗样；b)离子交换色谱纯化：收集洗脱馏分进行SDS‑PAGE电泳及HPLC分析检测，合并纯度高于80%的酪蛋白馏分；c)高效反相色谱精细纯化：对步骤b)中合并的酪蛋白馏分进行反相色谱纯化制备，收集各洗脱峰馏分，采用SDS‑PAGE电泳及HPLC分析检测，合并纯度高于95%的β‑酪蛋白馏分；d)脱盐及干燥处理：采用G25凝胶色谱对步骤c)中合并的β‑酪蛋白馏分进行脱盐处理，对脱盐后样品进行干燥处理，得β‑酪蛋白冻干粉。本发明方法收率高、稳定性好、条件温和且易于放大生产，另外也能够为后续研究β‑酪蛋白及乳品中标准蛋白检测提供高纯度对照品。
种牛乳中蛋白纯化制备方法

[发明专利]新型冠状病毒核衣壳蛋白N端结构域的制备方法及应用-CN202110768626.7在审
发明人：穆海东;汪宁梅;李敏 -专利权人：上海裕隆生物科技有限公司
申请日： 2021-07-07 - 公布日： 2021-11-19 - 主分类号： C07K14/165 文献下载
摘要：本发明的一种新型冠状病毒核衣壳蛋白N端结构域的制备方法，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，包括下列步骤：S1，预测：预测蛋白的N端结构域的氨基酸序列；S2，表达：通过大肠杆菌可溶性表达的方式表达所述蛋白；S3，纯化：通过镍亲和柱的结合，杂蛋白洗涤和洗脱的方法纯化所述的蛋白，即获得目标蛋白粗品；S4，精细纯化：目标蛋白通过分子筛进一步纯化，去除杂蛋白，即得到高纯度的2019新型冠状病毒核衣壳蛋白N端结构域
新型冠状病毒核衣壳蛋白结构制备方法应用

[发明专利]SFTSV膜蛋白原核双表达载体构建方法-CN202210203258.6在审
发明人：刘苗苗 -专利权人：济宁医学院
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N15/64 文献下载
摘要：本发明公开了SFTSV膜蛋白原核双表达载体构建方法，具体包括以下步骤：步骤一、基因分析；步骤二、优化合成；步骤三、表达构建；步骤四、纯化测试；本发明涉及分子病毒学技术领域。该SFTSV膜蛋白原核双表达载体构建方法，通过将病毒膜蛋白的两个基因片段构建在一个双表达载体上，实现两个蛋白的同时表达，并且通过Strep标签和His标签联合纯化的方式进行目的蛋白的提纯，其中Strep标签适合需要产出更高纯度目标蛋白的实验，且可弥补His标签不适用的金属蛋白和复合蛋白的纯化实验，为表达载体的构建提供稳定保障，方便后期对两个蛋白分别进行纯化，为评估两个蛋白的功能提供了便利，为病毒的防治提供思路
sftsv 膜蛋白原核双表达载体构建方法

[发明专利]一种从圆锥铁线莲叶片中提取纯化线粒体及其蛋白的有效方法-CN202211089427.4在审
发明人：朱玮;陶明磊;刘阿敏;刘胜志;杨丙贤;李瑶函 -专利权人：常熟求是科技有限公司
申请日： 2022-09-07 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种从圆锥铁线莲叶片中提取纯化线粒体及其蛋白的有效方法，属于植物生物技术领域。以适龄、涨势良好的圆锥铁线莲叶片为材料，通过处理优化材料、材料用量、优化操作及调整差速离心等手段降低杂质干扰，分离纯化叶片线粒体。将纯化后线粒体进行蛋白提取操作，与总蛋白相比，线粒体蛋白阳性标记anti‑VDAC1显著高于总蛋白，上升了约2倍；叶绿体阳性蛋白标记anti‑Rubisco activase和细胞核阳性蛋白标记anti‑Histone H3在较总蛋白比分别下降了约14倍和17倍，说明污染的细胞器得到了有效去除，线粒体被显著富集。本发明通过简单快捷的手段，首次建立一套适用于圆锥铁线莲叶片线粒体及其蛋白提取纯化的有效体系，为圆锥铁线莲线粒体蛋白质组的研究奠定了基础。
一种圆锥铁线莲叶片中提取纯化线粒体及其蛋白有效方法

[发明专利]一种重组人骨形态发生蛋白‑2的纯化生产方法-CN201310432794.4有效
发明人：张东刚;李东升 -专利权人：烟台正海生物科技股份有限公司
申请日： 2013-09-22 - 公布日： 2017-09-15 - 主分类号： C07K14/51 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人骨形态发生蛋白‑2的纯化生产方法。该方法包括如下步骤1）裂解含有rhBMP‑2蛋白的包涵体，得到包涵体裂解液；2）对所述包涵体裂解液依次进行亲和层析和阳离子交换层析，分离纯化得到变性重组人骨形态发生蛋白‑2溶液；3）对所述变性rhBMP‑2蛋白进行复性，得到复性rhBMP‑2蛋白粗品；4）对所述复性rhBMP‑2蛋白粗品依次进行亲和层析和凝胶过滤层析分离纯化，得到复性rhBMP‑2蛋白纯品。利用本发明所提供的方法纯化rhBMP‑2蛋白，制备的产品纯度达95%以上，蛋白收率为9.4%，内毒素和DNA残留均符合生物药物质量要求，本发明方法适于工业规模化生产；同时也为同类重组蛋白药物的研发生产提供参考
一种重组形态发生蛋白纯化生产方法