本发明涉及一种丙型肝炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒。所述的试剂盒包括:荧光定量反应液预混液、荧光定量反应液、阳性对照样品。所述荧光定量反应液包括含有检测HCV RNA的引物和探针序列的反应体系,其中,正向引物序列为SEQ ID NO:1,反向引物序列为SEQ ID NO:2,荧光探针序列为SEQID NO:3,其5′端标记荧光报告基团,3’端标记荧光淬灭基团;所述阳性对照样品为包含所检测HCV基因组片断RNA质粒。本发明提供了一种能快速、准确、高敏感度的检测血清、血浆中的丙型肝炎病毒的荧光定量PCR检测试剂盒。