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[发明专利]一种重组杆状病毒及其构建方法和应用-CN201810802361.6有效
发明人：付月君;卫丽丽;梁爱华;杜军;张志云 -专利权人：山西大学
申请日： 2018-07-20 - 公布日： 2021-09-28 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组杆状病毒及其构建方法和应用，所述重组病毒为核苷酸序列为SEQ ID No1.的基因通过转座重组整合到杆状病毒的基因组上获得的。本发明还提供了重组杆状病毒构建方法，包括从AcMNPV获得Ac‑pk2基因，将该基因构建到pFastBacDual‑egfp，通过Bac‑to‑Bac系统获得重组杆状病毒AcMNPV‑PK2‑EGFP。本发明重组杆状病毒可以通过营救翻译起始来帮助外源蛋白的表达，提高昆虫杆状病毒表达系统的蛋白产量，在杆状病毒昆虫表达系统作为真核表达系统的应用方面具有较好的应用前景。本发明的重组杆状病毒还可用于制备防治鳞翅目害虫的生物杀虫剂。
一种重组杆状病毒及其构建方法应用

[发明专利]一种杆状病毒表达系统中杆状病毒的灭活方法-CN201710437697.2在审
发明人：张世贤;李新江;谭淑萍 -专利权人：舒泰神（北京）生物制药股份有限公司;北京三诺佳邑生物技术有限责任公司
申请日： 2017-06-12 - 公布日： 2018-12-18 - 主分类号： C12N7/06 文献下载
摘要：本发明公开一种杆状病毒表达系统中杆状病毒的灭活方法，包括在杆状病毒表达系统表达的含有目的产物的收获液中加入灭活剂的步骤；所述灭活剂由去污剂和有机溶剂组成，其中所述去污剂占所述收获液和灭活剂的总体积的0.5本发明的方法能对杆状病毒表达系统中的杆状病毒进行有效灭活，同时又能保持杆状病毒表达系统生产出的AAV病毒和重组蛋白的活性，为杆状病毒表达系统生产的AAV和重组蛋白的安全性提供新的保障。
杆状病毒表达系统灭活剂杆状病毒去污剂收获液有机溶剂重组蛋白灭活有机溶剂组成安全性提供有效灭活体积比优选生产

[发明专利]一种用高效液相色谱仪进行杆状病毒定量的新方法-CN201310656264.8无效
发明人：李俊辉;赵毅 -专利权人：新疆天康畜牧生物技术股份有限公司
申请日： 2013-12-06 - 公布日： 2014-04-23 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明提供的是一种用高效液相色谱仪进行杆状病毒定量的新方法，采用杆状病毒的稀释、杆状病毒的固定、杆状病毒的透化、杆状病毒的染色、染色后的杆状病毒在高效液相色谱仪上进行标准曲线的制定和待测样品的定量;按上述方法同时进行待测杆状病毒的稀释、杆状病毒的固定、杆状病毒的透化、杆状病毒的染色、染色后色杆状病毒在高效液相色谱仪上测定样品的最大吸收峰值，根据确立的标准曲线计算样品的待测样品的病毒毒价。采用的新方法与常规方法相比，极大的缩短了杆状病毒定量的时间，提高了病毒定量的灵敏度，降低了实验成本，提高实验功效。
一种高效色谱仪进行杆状病毒定量新方法

[发明专利]杆状病毒微滴式数字PCR检测方法及其应用-CN202310390771.5在审
发明人：许煜华;彭涛;黄天威;苏文瀚 -专利权人：广东华南疫苗股份有限公司
申请日： 2023-04-13 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明属于杆状病毒检测技术领域，具体涉及杆状病毒微滴式数字PCR检测方法及其应用。为实现杆状病毒的快速检测，本发明根据杆状病毒的GP64基因设计引物和探针，并优化反应条件和反应程序，同时通过特异性、敏感性和重复性试验对所建立数字PCR方法进行评估，并确定病毒拷贝数和病毒滴度之间的线性关系，从而建立一种杆状病毒的微滴式数字PCR检测方法，为杆状病毒的定性或定量检测提供新的手段。本发明所建立的杆状病毒数字PCR方法稳定，特异性好，灵敏度高，重复性好，能快速实现杆状病毒检测，3‑4个小时即可完成，为实现对杆状病毒的检测提供了一种快速简便的技术手段，更好地指导基于该病毒的表达系统在生产上的应用
杆状病毒微滴式数字 pcr 检测方法及其应用

[发明专利]表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP55的重组杆状病毒及应用-CN201711166463.5在审
发明人：王浩;吕利群;喻飞;刘玮莎;王龙龙 -专利权人：上海海洋大学
申请日： 2017-11-21 - 公布日： 2018-04-06 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP55的重组杆状病毒及应用。重组杆状病毒为构建pFast‑HTA‑VP55重组质粒并转化至杆状病毒中所产生。本发明通过构建pFast‑HTA‑VP55质粒，利用杆状病毒表达系统，重组表达了带有his标签蛋白的草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP55可溶蛋白的杆状病毒，利用此杆状病毒可以感染SF9(昆虫细胞)大量的表达可溶性的VP55蛋白，并应用于分子病毒学的相关操作。
表达草鱼呼肠孤病毒刺蛋白 vp55 重组杆状病毒应用

[发明专利]表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP56的重组杆状病毒及应用-CN201711166464.X在审
发明人：吕利群;王浩;喻飞;李婉娟;孙皓;盛佳璐 -专利权人：上海海洋大学
申请日： 2017-11-21 - 公布日： 2018-04-06 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP56的重组杆状病毒及应用。重组杆状病毒为构建pFast‑HTA‑VP56重组质粒并转化至杆状病毒中所产生。本发明通过构建pFast‑HTA‑VP56质粒，利用杆状病毒表达系统，重组表达了带有his标签蛋白的草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP56可溶蛋白的杆状病毒，利用此杆状病毒可以感染SF9(昆虫细胞)大量的表达可溶性的VP56蛋白，并应用于分子病毒学的相关操作。
表达草鱼呼肠孤病毒刺蛋白 vp56 重组杆状病毒应用

[发明专利]一种用于对虾的假型昆虫杆状病毒基因转移系统、病毒及构建方法和应用-CN202010196617.0有效
发明人：郭华荣;毋梦茜 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2020-03-19 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于对虾的假型昆虫杆状病毒基因转移系统、病毒及构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明所述用于对虾的假型昆虫杆状病毒基因转移系统，包括Bac‑to‑Bac昆虫杆状病毒表达系统、对虾病毒囊膜蛋白基因表达质粒和昆虫包装细胞。本发明所述用于对虾的假型昆虫杆状病毒基因转移系统能够在对虾组织和细胞中稳定高效地转移与表达外源基因。
一种用于对虾昆虫杆状病毒基因转移系统病毒构建方法应用

[发明专利]一种长效稳定表达的杆状病毒载体及其构建方法-CN201911183740.2在审
发明人：王志昇;杨萌萌;李梦婷;姬勇敢;杨文;陈健茂 -专利权人：宁夏医科大学
申请日： 2019-11-27 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组杆状病毒载体及其构建方法，所述重组杆状病毒载体包含SB转座子和编码衰减加速因子(DAF)的基因，所述构建方法包含将SB转座子和编码衰减加速因子(DAF)的基因克隆至杆状病毒载体的步骤。本发明构建的重组杆状病毒表达系统，能够实现外源蛋白的长效、稳定表达。利用本发明构建的重组杆状病毒表达系统在小鼠体内表达hEA(内皮抑素和血管抑素的融合蛋白)，显著提高了荷瘤小鼠的寿命和存活率。本发明的重组杆状病毒表达系统还能有效抵抗血清补体系统的攻击，还能同时借助SB转座系统表达EGFP等荧光蛋白，便于在哺乳动物细胞中持续观察荧光的表现。
构建重组杆状病毒表达重组杆状病毒载体加速因子转座子衰减哺乳动物细胞杆状病毒载体荷瘤小鼠基因克隆内皮抑素融合蛋白体内表达外源蛋白稳定表达血管抑素血清补体荧光蛋白转座系统存活率荧光小鼠抵抗攻击基因观察表现

[发明专利]一种杆状病毒感染昆虫细胞生产AAV基因药物的系统及方法-CN202110159142.2在审
发明人：董文吉;刘子瑾;赵忠亮;曹帆;程谟斌;张艳君 -专利权人：中吉智药（南京）生物技术有限公司
申请日： 2021-02-04 - 公布日： 2021-05-28 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种杆状病毒感染昆虫细胞生产AAV的系统，其包括：第一杆状病毒、第二杆状病毒、第三杆状病毒和Sf9细胞；第一杆状病毒的基因组上整合了编码Rep78蛋白的表达盒与编码Cap蛋白VP2的表达盒，其中编码Rep78蛋白的基因由polyhedrin启动子驱动表达，编码Cap蛋白VP2的基因由p10启动子驱动表达；第二杆状病毒的基因组上整合了编码Rep52蛋白的表达盒与编码Cap蛋白VP1的表达盒，其中编码Rep52蛋白的基因由polyhedrin启动子驱动表达，编码Cap蛋白VP1的基因由p10启动子驱动表达；第三杆状病毒的基因组上整合了携带目的基因表达盒的AAV载体序列；利用第一杆状病毒、第二杆状病毒、第三杆状病毒共同感染Sf9细胞生产携带目的基因的AAV。
一种杆状病毒感染昆虫细胞生产 aav 基因药物系统方法

[发明专利]一种抗细胞凋亡的重组杆状病毒载体及其制备方法-CN201610257513.X在审
发明人：不公告发明人 -专利权人：北京康宝利华生物科技有限公司
申请日： 2016-04-23 - 公布日： 2017-10-31 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗细胞凋亡的重组杆状病毒载体的制备方法，把干扰昆虫细胞caspase‑1表达的小RNA的基因和调控序列敲入到杆状病毒载体骨架上，制作出能延长感染细胞存活期的重组杆状病毒载体。本发明获得的重组Bacmid，可作为病毒载体，用于构建表达外源基因的重组杆状病毒。所获得的重组杆状病毒感染昆虫细胞后，病毒滴度可显著得到提高，外源蛋白表达的时间可延长到感染后5‑6天。本发明获得的杆状病毒载体可直接用于优化杆状病毒/昆虫细胞表达系统，通过病毒滴度的提高可降低病毒生产的成本，通过延长表达时间可提高外源蛋白的表达水平。
一种细胞重组杆状病毒载体及其制备方法

[发明专利]一种检测重组杆状病毒基因组滴度的方法-CN202210953046.X有效
发明人：雷静;周园;蒋鑫;王沁瑜;程志茹;徐刚明;郑艳军;陈琪 -专利权人：上海药明生基医药科技有限公司
申请日： 2022-08-10 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测重组杆状病毒基因组滴度的方法，包括使用新型prepGEM酶裂解重组杆状病毒，5‑15分钟裂解病毒，2‑10分钟使酶失活，杆状病毒基因组滴度用ddPCR方法检测。本发明操作简单，病毒裂解液可以直接用于ddPCR或qPCR反应。本发明从处理病毒到获得病毒基因组滴度数据，只需要6小时，完全满足用重组杆状病毒系统生产rAAV工艺中，在轮与轮放大生产之间，需要在前一轮生产末快速、准确地检测重组杆状病毒基因组滴度，以确定下一轮生产用于感染昆虫细胞的杆状病毒的精确用量，从而实现用重组杆状病毒生产rAAV级级放大的无缝衔接。
一种检测重组杆状病毒基因组方法

[发明专利]杆状病毒表达系统及其构建方法和应用-CN202010716613.0在审
发明人：施金秀;罗燕;林映君;蒙伟能;叶知晟;蓝田 -专利权人：云舟生物科技（广州）有限公司
申请日： 2020-07-23 - 公布日： 2020-10-23 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种杆状病毒表达系统及其构建方法和应用，包括杆状病毒穿梭载体、辅助载体和供体载体；所述杆状病毒穿梭载体上含有Tn7靶位点和毒素蛋白基因表达盒；所述辅助载体上含有抗毒素蛋白基因表达盒，所述抗毒素蛋白能够与所述毒素蛋白结合从而中和所述毒素蛋白的毒性利用本发明的杆状病毒表达系统，可快速直接地提取得到一种能够直接用于下游杆状病毒包装的高纯度无污染的重组阳性杆状病毒载体。
杆状病毒表达系统及其构建方法应用

[发明专利]一种增强杆状病毒对昆虫细胞感染性的方法及其重组杆状病毒和应用-CN201910524105.X有效
发明人：郝碧芳;罗得勇;黄金山;沈兴家 -专利权人：江苏科技大学
申请日： 2019-06-17 - 公布日： 2022-04-26 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强杆状病毒感染性的方法及其重组杆状病毒和应用，该方法将埃博拉GP蛋白基因重组到杆状病毒基因组上，产生的重组病毒经过测定，可以明显提高杆状病毒的滴度，增强感染性，可以在病毒繁殖扩增过程中，加入少量病毒可达到高的感染性，节省生产成本。本发明的使用不但可以降低杆状病毒扩增成本，同时获得的高感染性重组杆状病毒也可改善杆状病毒作为生物杀虫剂杀虫速度慢等缺点；本发明还可促进昆虫杆状病毒与宿主细胞相互作用、杆状病毒受体以及杆状病毒入侵宿主的机制等研究的发展
一种增强杆状病毒昆虫细胞感染性方法及其重组应用

[发明专利]高产杆状病毒的草地贪夜蛾蛹卵巢细胞系及其构建和用途-CN202210005201.5在审
发明人：张寰;佟岩;孟茜;秦启联;李瑄;张继红;王红托;苗麟;郭力 -专利权人：中国科学院动物研究所
申请日： 2022-01-04 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12N5/07 文献下载
摘要：本发明提供了一种高产杆状病毒的草地贪夜蛾蛹卵巢细胞系，该细胞系被命名为IOZCAS‑Sf‑1，其保藏号为CGMCC No.21014。本发明还公开了该细胞系的制备方法，以及该细胞系在杆状病毒规模化生长上的用途。该细胞系可以用来复制杆状病毒，用于杆状病毒杀虫剂的规模化生产，以及构建杆状病毒表达载体系统，表达具有商业或科学价值的蛋白质。
高产杆状病毒草地夜蛾卵巢细胞系及其构建用途

[发明专利]一种鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法-CN201910699678.6在审
发明人：李强;栾林林 -专利权人：盐城工学院
申请日： 2019-07-31 - 公布日： 2019-11-29 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供了一种鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法，其是以提取的CyHV‑2 cDNA为模板，扩增出ORF72基因，将扩增的ORF72基因连接至杆状病毒载体pFastBac HTA中，构建重组杆状病毒载体pFastBac HTA‑CyHV‑ORF72，转化至大肠杆菌感受态细胞DH10Bac中，获得重组穿梭杆粒rBacmid‑CyHV‑ORF72，鉴定正确后将其转染至Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒，并将重组杆状病毒进行传代扩增，将高滴度的含有CyHV ORF72基因的杆状病毒接到sf9昆虫细胞中进行CyHV ORF72蛋白的真核表达。选用本发明方法构建鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72蛋白重组杆状病毒表达载体，并利用重组杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72蛋白，为鲤疱疹病毒血清学ELISA检测方法的建立奠定了基础。
疱疹病毒Ⅱ型扩增杆状病毒表达载体重组杆状病毒蛋白重组构建蛋白大肠杆菌感受态细胞重组杆状病毒表达重组杆状病毒载体传代杆状病毒载体杆状病毒基因连接昆虫细胞真核表达疱疹病毒基因高滴度血清学杆粒转染制备转化

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