本发明公开了一种蜘蛛毒素与化学杀虫剂组合复配杀虫剂及其制备方法和应用,所述组合复配杀虫剂包括拟环纹豹蛛毒素PPTX‑04和醚菊酯,所述拟环纹豹蛛毒素PPTX‑04其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示本发明首次发现蜘蛛毒素PPTX‑04的作用位点特异,与醚菊酯协同调控昆虫钠离子通道,在靶标层面形成增效,并据此提供了一种对害虫具有显著增效作用的毒素‑杀虫剂复配剂。该复配剂对害虫的防治效果显著优于两种单剂的防治效果,减少了杀虫剂的使用量,降低了多种农业害虫、卫生害虫的防治成本,对于害虫抗性防治具有重要作用。