本发明提出了一种源自米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC 40186的新型10家族木聚糖酶催化域基因cDNA序列的克隆及分析、质粒构建及表达方法,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。生物信息学分析表明该木聚糖酶催化域属于糖苷水解酶第10家族,命名为Aor Xyn10BC,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2,相应的基因命名为Aor xyn10BC。本发明还公开了木聚糖酶工程菌的构建以及重组木聚糖酶的高效表达和纯化的方法。作为一种新型酶制剂,该木聚糖酶具有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值,也为其它木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
本发明属于酶工程技术领域,具体涉及一种产壳四糖的壳聚糖酶突变体。所述壳聚糖酶来源于枯草芽孢杆菌的46家族糖苷水解酶壳聚糖酶(BsCsn46A),以氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的壳聚糖酶BsCsn46A为出发酶,通过计算机辅助模拟分析壳聚糖酶底物通道,同时将BsCsn46A与底物进行分子对接,确定可能会对壳聚糖酶水解产物聚合度有影响的氨基酸位点,对这些氨基酸位点进行定点突变,分别突变成酸性氨基酸E(谷氨酸)及碱性氨基酸K(赖氨酸)。本发明获得两种壳聚糖酶突变体T50E和E203K,与原始酶相比,突变体酶水解壳聚糖除产生COS2和COS3外,还有壳四糖(COS4)生成。