本发明公开了一种柱状黄杆菌基因定向敲除质粒及应用，本发明提供了一种柱状黄杆菌基因定向敲除质粒，其序列为SEQ ID NO.1所示。利用该质粒，可以实现对柱状黄杆菌目的DNA片段的定向敲除、对其开展功能研究，进而实现对柱状黄杆菌致病机理的研究，可用于构建柱状黄杆菌基因缺失株或构建弱毒疫苗，本发明构建的定向敲除质粒，能够使sacB基因在黄杆菌中很好地表达，赋予其蔗糖敏感性，获得了无标记基因的突变株，成功克服了柱状黄杆菌基因定向敲除中遇到的最大障碍。
本发明属于分子生物学领域，公开了一种柱状黄杆菌毒力蛋白在病原检测和弱毒株制备中的应用，所述的柱状黄杆菌毒力蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。利用该毒力蛋白，设计抗体，可用于柱状黄杆菌病原菌的检测。通过在柱状黄杆菌上缺失编码该蛋白的毒力基因，可获得柱状黄杆菌弱毒株，利用该弱毒株，可以实现柱状黄杆菌感染鱼类细胞系和鱼体的能力下降；进而作为候选疫苗株，实现对柱状黄杆菌引发的柱形病的免疫防控。
本发明涉及生物技术领域，本发明公开了一种黄颡鱼杆菌样病毒全基因组克隆方法。方法的步骤为：设计14条特异性引物用于反转录和14对特异性引物用于PCR，引物序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.14；提取黄颡鱼杆菌样病毒RNA；以提取的病毒RNA为模板，用上述引物分别添加到反转录和PCR反应体系，反应条件分段克隆克隆黄颡鱼杆菌样病毒全基因组，扩增的产物其中13个片段大小为2000bp，一个片段大小为1000bp，共计14个片段含盖黄颡鱼杆菌样病毒基因组全部序列。本发明提供了黄颡鱼杆菌样病毒全基因组的克隆方法，该方法不仅可以用于黄颡鱼杆菌样病毒全基因组的快速克隆，也可以用于研究黄颡鱼杆菌样病毒的分子生物学致病机制和分子流行病学调查，使用方便，具有良好的效果。
