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[发明专利]一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的构建方法及应用-CN201710467704.3在审
发明人：曹远东;曾二生;潘烘;周华娇;易松强 -专利权人：江西嘉博生物工程有限公司
申请日： 2017-06-20 - 公布日： 2018-04-17 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的构建方法及应用，该重组重组乳酸乳球菌的构建方法是（1）按照宿主菌乳酸乳球菌的密码子偏好性进行优化而合成溶葡球菌素基因与乳酸乳球菌质粒；（2）将合成的溶葡球菌素基因与乳酸乳球菌质粒同时双酶切、回收、连接，转化至大肠杆菌CM1061感受态细胞中；（3）使用氯霉素抗性进行筛选后，经酶切鉴定、PCR鉴定得出正确的重组质粒后，提取重组质粒并电转至乳酸乳球菌中，得到重组乳酸乳球菌；（4）Western Blot鉴定重组乳酸乳球菌的表达结果。本发明既可发挥乳酸乳球菌的益生菌功效，又可发挥猪溶葡球菌素杀灭肠道内葡萄球菌，预防和治疗葡萄球菌病的功效。
一种表达球菌基因重组乳酸构建方法应用

[发明专利]重组乳酸乳球菌和罗非鱼无乳链球菌病疫苗-CN201910734708.2有效
发明人：赖迎迢;石存斌;陶家发;袁玉梅;孙承文;巩华 -专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所
申请日： 2019-08-09 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种重组乳酸乳球菌，其包含无乳链球菌的sip基因和pgk基因的融合基因，所述融合基因是通过质粒载体被导入到乳酸乳球菌的。所述融合基因具有由SEQ No.1所示的DNA序列。所述乳酸乳球菌是乳酸乳球菌Lactococcus.lactis NZ9000。本发明还提供一种罗非鱼无乳链球菌病疫苗，其包括上述重组乳酸乳球菌。所述重组乳酸乳球菌是利用乳酸链球菌素诱导后的重组乳酸乳球菌。所述疫苗是通过口服灌胃给药的疫苗。所述罗非鱼无乳链球菌病疫苗包括浓度为2×1010cfu·mL‑1的所述重组乳酸乳球菌，给药剂量为200μL。
重组乳酸球菌罗非鱼链球菌疫苗

[发明专利]基于pgk基因的重组乳酸乳球菌和无乳链球菌病疫苗-CN201910735342.0在审
发明人：赖迎迢;石存斌;陶家发;袁玉梅;孙承文;巩华 -专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所
申请日： 2019-08-09 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基于pgk基因的重组乳酸乳球菌，其包含无乳链球菌的pgk基因，所述pgk基因通过质粒载体被导入到乳酸乳球菌。所述pgk基因具有由SEQ No.1所示的DNA序列。所述质粒载体是pNZ8148载体。所述乳酸乳球菌是乳酸乳球菌NZ9000。本发明还提供一种罗非鱼无乳链球菌病疫苗，其包括上述的重组乳酸乳球菌，所述重组乳酸乳球菌是在存在乳酸链球菌素的条件下诱导培养后的重组乳酸乳球菌。所述罗非鱼无乳链球菌病疫苗包括浓度为2×10
重组乳酸乳球菌疫苗乳酸乳球菌基因无乳链球菌病质粒载体罗非鱼乳酸链球菌素无乳链球菌给药剂量诱导培养给药灌胃

[发明专利]一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌-CN202110575568.6在审
发明人：袁翔雨;张雅琪;辛怡娆;杨顺;费辉 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2021-05-26 - 公布日： 2021-08-06 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌，所述的重组乳酸乳球菌为转化了pMG36e‑His‑G蛋白重组质粒的乳酸乳球菌，本发明中的表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌的制备方法具体如下：首先通过全基因合成His‑G蛋白序列，然后连接至pMG36e质粒，构建pMG36e‑His‑G蛋白重组质粒，然后通过电转化至乳酸乳球菌，经红霉素抗性筛选和菌落PCR鉴定筛选获得阳性克隆的重组乳酸乳球菌，最后利用抗His抗体，采用western blotting分析重组乳酸乳球菌表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的情况。本发明成功构建表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的乳酸乳球菌，因乳酸乳球菌的保护，可以递送大口黑鲈弹状病毒G蛋白进入鱼体肠道，为大口黑鲈弹状病毒口服疫苗的研制提供重要基础。
一种表达大口弹状病毒蛋白重组乳酸球菌

[发明专利]H9N2禽流感HA1蛋白重组乳酸乳球菌载体的构建方法-CN202211450582.4在审
发明人：葛叶;姚秋成;刘慧珍 -专利权人：广东海洋大学
申请日： 2022-11-18 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种H9N2禽流感HA1蛋白重组乳酸乳球菌载体的构建方法，其技术方案包括下述步骤：1)目的基因片段合成及酶切鉴定；2)目的基因与表达载体pNZ8149酶切与连接；3)乳酸乳球菌感受态的制备；4)重组乳酸乳球菌的电转化；5)重组乳酸乳球菌NZ3900/pNZ8149‑HA1质粒的提取及鉴定；6)重组乳酸乳球菌NZ3900/pNZ8149‑HA1诱导表达条件优化及Western blot鉴定目的蛋白诱导表达；本申请提供的技术方案通过构建H9N2禽流感HA1蛋白重组乳酸乳球菌载体，使H9N2禽流感的HA1蛋白可以表达在乳酸乳球菌外表面，为后续研制重组乳酸菌口服疫苗奠定基础。
h9n2 禽流感 ha1 蛋白重组乳酸球菌载体构建方法

[发明专利]重组乳酸乳球菌、益生菌制剂、构建方法、cECF表达方法及应用-CN202310718321.4在审
发明人：邓干臻;巩英慧;贺宇成;张金鑫;冯文;袁永杰;余吉平;雷湘 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2023-06-16 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本申请公开了一种重组乳酸乳球菌、益生菌制剂、构建方法、cECF表达方法及应用。该重组乳酸乳球菌为转入了无抗分泌表达cEGF的重组质粒的乳酸乳球菌NZ3900。该重组乳酸乳球菌不仅能够无抗表达cECF促进肠道发育和修复，还具有益生效果，以及具有增强机体的免疫能力和生长性能。该重组乳酸乳球菌对常见肠道致病菌具有明显的抑菌效果，可耐受胃酸及肠道胆盐高渗透压环境，可在肠道定殖发挥益生作用。
重组乳酸球菌益生菌制剂构建方法 cecf 表达应用

[发明专利]一种提高乳酸乳球菌抗氧化活性的方法及其应用-CN202211279728.3在审
发明人：艾连中;熊智强;夏永军;王光强;宋馨;张汇 -专利权人：上海理工大学
申请日： 2022-10-19 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高乳酸乳球菌抗氧化活性的方法及其应用，一种提高乳酸乳球菌抗氧化活性的方法，通过构建产番茄红素的重组乳酸菌，从而提高乳酸乳球菌抗氧化活性，构建产番茄红素的重组乳酸菌方法为构建番茄红素异源合成质粒，敲除乳酸乳球菌中乳酸脱氢酶(ldh)基因或过表达不同来源菌株中的MVA途径基因，得到重组乳酸乳球菌，从而实现乳酸乳球菌异源合成番茄红素。与现有技术相比，本发明通过构建一株产番茄红素的重组乳酸菌，测定自身和在脱脂乳中的抗氧化活性，发现重组乳酸乳球菌的抗氧化活性比出发菌株提高了1倍以上，且DPPH、ABTS和·OH自由基清除能力等显著增强，
一种提高乳酸球菌氧化活性方法及其应用

[发明专利]一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用-CN201910091383.0有效
发明人：乔建军;薛二淑;吴昊;财音青格乐;宋倩倩;田开仁;支宁 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-01-30 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用，通过过表达murF基因得到重组乳酸乳球菌菌株。构建菌株的方法：将乳酸乳球菌菌株的基因murF连接到质粒载体上，获得重组质粒；将重组质粒电转到乳酸乳球菌中，选取阳性转化子，获得重组菌株。重组乳酸乳球菌菌株可提高菌株的耐酸性和乳酸链球菌素(Nisin)产量。本发明的重组菌株对产物Nisin和菌株抗逆性有明显的影响。其中Nisin是一种安全无毒的食品防腐剂。
一种重组乳酸球菌菌株及其制备方法应用

[发明专利]一株表达耐热α-淀粉酶基因的重组乳酸乳球菌及构建方法与应用-CN201710467579.6在审
发明人：曹远东;邱勋华;周华娇;汪石粮;易松强;付杰 -专利权人：江西嘉博生物工程有限公司
申请日： 2017-06-20 - 公布日： 2018-12-21 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种表达耐热α‑淀粉酶基因的重组乳酸乳球菌及构建方法与应用，该重组乳酸乳球菌的构建方法包括以下步骤：（1）合成超嗜热古菌(Thermococcussp.HJ21)菌株产耐热α‑淀粉酶基因，在序列上游添加6个组氨酸的基因序列，并在其上下游分别引入NcoI和XbaI两个限制性内切酶位点；（2）构建重组质粒：将耐热α‑淀粉酶基因克隆到乳酸乳球菌质粒pNZ8148并转化到大肠杆菌MC1061；（3）重组质粒电转化到乳酸乳球菌NZ9000中，得到表达耐热α‑淀粉酶的重组乳酸乳球菌。本发明中重组乳酸乳球菌诱导表达产物采用喷雾方式直接喷洒在饲料表面饲喂猪，既可发挥乳酸乳球菌促进增重和降低料重比等益生菌功效，又可发挥耐热α‑淀粉酶促进猪肠道消化淀粉类饲料的功效。
重组乳酸乳球菌耐热 α -淀粉酶基因淀粉酶基因乳酸乳球菌构建淀粉酶限制性内切酶位点构建重组质粒诱导表达产物大肠杆菌基因序列喷雾方式饲料表面重组质粒电转化益生菌猪肠道组氨酸古菌菌株饲喂增重质粒淀粉喷洒应用合成克隆饲料消化上游引入转化

[发明专利]重组乳酸乳球菌和罗非鱼无乳链球菌病疫苗-CN202010549557.6在审
发明人：赖迎迢;石存斌;陶家发;袁玉梅;孙承文;巩华 -专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所
申请日： 2020-06-16 - 公布日： 2020-09-22 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基于无乳链球菌fbsA基因的重组乳酸乳球菌，所述重组乳酸乳球菌包含无乳链球菌的fbsA基因或其片段，该fbsA基因或其片段优选具有由SEQ ID No.1所示的序列。重组乳酸乳球菌的保藏编号是CCTCC M 2020140，其在存在乳酸菌肽的培养条件下能诱导表达分子量理论值为34.6kDa的重组FbsA蛋白。本发明还提供基于该重组乳酸乳球菌制备的罗非鱼无乳链球菌病疫苗，该疫苗通过口服灌胃免疫罗非鱼后能够在罗非鱼体内产生保护性抗体，从而有效地帮助罗非鱼抵御无乳链球菌的感染。
重组乳酸球菌罗非鱼链球菌疫苗

[发明专利]抗艰难梭菌的重组乳酸乳球菌、活载体疫苗及其制备方法-CN202011379456.5有效
发明人：刘开云;郭刚;舒月力;李彦;王宁;孙敏 -专利权人：四川大学华西医院
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗艰难梭菌的重组乳酸乳球菌及其制备方法，其由艰难梭菌亚单位TcdA质粒转化入乳酸乳球菌载体得到。该重组乳酸乳球菌可短期粘附定植、繁殖于肠道内，表达TcdA蛋白，诱导机体产生免疫反应，从而产生特异性抗体。本发明进一步提供了一种以重组乳酸乳球菌为有效活性成分的活载体疫苗，用于预防由艰难梭菌感染所引起的疾病。
艰难重组乳酸球菌载体疫苗及其制备方法

[发明专利]一种重组乳酸乳球菌及其构建方法和应用-CN201811620318.4在审
发明人：华子春;蒋月 -专利权人：华子春;江苏靶标生物医药研究所有限公司
申请日： 2018-12-28 - 公布日： 2019-05-03 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了一种重组乳酸乳球菌及其构建方法和应用。本发明构建的一种重组乳酸乳球菌能够表达人内皮抑素且重组乳酸质粒能稳定遗传。根据本发明所构建的重组乳酸乳球菌，能够应用于制备抗肿瘤药物或食品中，包括：抑制肿瘤的生长、延长荷瘤模型生存期、促进肿瘤大面积坏死、抗肿瘤转移的药物或食品中的应用。
重组乳酸乳球菌构建应用制备抗肿瘤药物生物技术领域抗肿瘤转移人内皮抑素稳定遗传抑制肿瘤坏死乳酸质粒肿瘤生长

[发明专利]一种重组牛流行热病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体及其构建方法和应用-CN202210197668.4在审
发明人：王晓虎;王艳云;张翩;陈晶;向华;黄元;王刚 -专利权人：广东省农业科学院动物卫生研究所
申请日： 2022-03-01 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种重组牛流行热病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体及其构建方法和应用，本发明首先将pgsA基因连接至NICE表达系统中构建得到pgsA重组质粒，然后将牛流行热病毒的G基因连接至上述的pgsA重组质粒中，最后转化至乳酸乳球菌感受态细胞中构建得到重组牛流行热病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体。本发明构建的重组牛流行热病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体利用pgsA锚定蛋白的特性，将牛流行热病毒糖蛋白融合表达，使牛流行热病毒糖蛋白表达在乳酸乳球菌的外表面，不仅可以用于制备牛流行热病毒的重组G蛋白，而且可以为跨膜表达体系的建立和新型口服基因工程疫苗的研制奠定基础
一种重组流行病毒糖蛋白乳酸球菌载体及其构建方法应用

[发明专利]高产乳酸链球菌素的乳酸乳球菌重组菌株及其构建方法和应用-CN202211264864.5在审
发明人：乔建军;熊慧;吴昊;刘家亨;徐程杨 -专利权人：天津大学浙江绍兴研究院
申请日： 2022-10-17 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了高产乳酸链球菌素的乳酸乳球菌重组菌株及其构建方法和应用，其中的构建方法为：敲除乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)YF11保藏编号为CGMCC No.12429基因组中的乳酸脱氢酶基因ldh，得到高产乳酸链球菌素的乳酸乳球菌重组菌株YF11ΔLDH；本发明的重组菌株，通过代谢通路分流的策略实现了乳酸乳球菌乳亚种YF11碳代谢的再分配，减少流向乳酸的碳通量，从而减轻了发酵后期由于乳酸积累对菌株细胞活性造成的影响，发酵液中菌体量增加，进而提高了nisin的产量，可增加发酵液中菌体量，减缓发酵液pH下降趋势，显著提高nisin产量。
高产乳酸链球菌素球菌重组菌株及其构建方法应用

[发明专利]一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌及构建方法-CN201710467703.9在审
发明人：曹远东;周志;曾二生;潘烘;汪石粮 -专利权人：江西嘉博生物工程有限公司
申请日： 2017-06-20 - 公布日： 2017-11-07 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达猪表皮生长因子基因的重组乳酸乳球菌及构建方法将合成的pEGF基因与乳酸乳球菌质粒pNZ8148同时双酶切、回收、连接，转化至大肠杆菌CM1061感受态细胞中，使用氯霉素抗性进行筛选后，经PCR鉴定得出正确的重组质粒后，提取重组质粒并电转至乳酸乳球菌NZ9000中，再经PCR鉴定正确，得到重组乳酸乳酸球pEGF‑pNZ8148‑NZ9000；本发明对表达的重组猪表皮生长因子进行了纯化，并对重组蛋白进行了Tricine‑SDS‑PAGE鉴定。
一种表达表皮生长因子基因重组乳酸球菌构建方法

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