本发明公开一种重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK‑M1及其制备方法，本发明从改造重组布氏白僵菌的蛋白酶K分子结构入手，得到活性和稳定性均提高的蛋白酶K突变体PK‑M1，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；优化表达系统，利用酵母细胞外分泌表达技术，可大规模发酵高效表达重组蛋白酶K突变体，进一步提高蛋白酶K产量；采用高效亲和层析的蛋白纯化方式，提高蛋白酶K纯化过程中的收率，实现了蛋白酶K的规模化生产。
本发明公开一种重组布氏白僵菌蛋白酶K突变体PK‑M2及其制备方法，本发明从改造重组布氏白僵菌的蛋白酶K分子结构入手，得到活性和稳定性均提高的蛋白酶K突变体PK‑M2，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；优化表达系统，利用酵母细胞外分泌表达技术，可大规模发酵高效表达重组蛋白酶K突变体，进一步提高蛋白酶K产量；采用高效亲和层析的蛋白纯化方式，提高蛋白酶K纯化过程中的收率，实现了蛋白酶K的规模化生产。
本发明公开了来自山冈单胞菌的蛋白酶及其相关生物材料与应用。本发明所提供的蛋白酶，是如下a)或b)的蛋白质：a)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.2的蛋白质；b)将序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有蛋白酶活性的蛋白质该蛋白酶具有较高的酶活性，最适作用pH为7，最适温度30℃，在10℃时仍保持70％以上酶活力，该蛋白酶为中性低温金属蛋白酶。
本发明公开了一种V8蛋白酶的制备方法。所述方法包括如下步骤：使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述V8蛋白酶，所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于V8蛋白酶的N端后所得；所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No本发明采用四种不同信号肽Sig、DsbA、PelB和STII制备V8蛋白酶，并通过对V8蛋白酶表达量进行分析发现：PelB信号肽可以高效引导V8蛋白酶分泌至周质空间，其表达量显著高于其它信号肽，是V8蛋白酶周质空间分泌表达的最佳信号肽，可用于V8蛋白酶制品的表达和制备工作。
本发明属于蛋白酶技术领域，具体涉及一种角蛋白酶，还涉及上述角蛋白酶在水解动物角质原料中的应用。本发明所述及的角蛋白酶LbKer来源于溶杆菌CGMCC No.16072，其耐受温度大于55℃，在pH范围为5.0‑9.0下具有酶活，该角蛋白酶发酵粗酶液12h对动物角蛋白原料降解率均达到60%以上，并且具有序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，具有上述氨基酸序列的角蛋白酶是目前首次报道的一种新型的蛋白序列，与已报道的几角蛋白酶蛋白序列相似度较低。本发明所提供的角蛋白最大的优点是：具有底物谱较宽、对羊毛降解效率高等特性。
本发明公开了一种深海细菌角蛋白酶及其编码基因、酶蛋白生产工程菌和应用。本发明提供了SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列组成的蛋白酶，或经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有角蛋白酶活性衍生的蛋白质，以及其编码的基因序列。一种深海细菌角蛋白酶基因kr0631，具有序列表SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列，其编码的蛋白酶序列为SEQ ID NO.2。该蛋白酶具有降解角蛋白的特性，一种信号肽序列与蛋白酶基因的组合，使重组酶的胞外产量获得显著提高。本发明在环境废弃难降解蛋白类有机物的处理方面具有广泛的用途。
