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[发明专利]α-突触核蛋白底物及其制备和使用方法-CN202180048701.0在审
发明人：路易斯·康查;卡莉·法里斯;布雷特·霍尔金;马轶骅 -专利权人：安培里翁公司;路易斯·康查;卡莉·法里斯;布雷特·霍尔金;马轶骅
申请日： 2021-05-18 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明提供了用于产生人α‑突触核蛋白(αS)蛋白或其保守变体的表达载体，蛋白或其保守变体在αS种子扩增测定(SAA)中表现出降低的自聚集倾向。表达载体包括编码人αS蛋白或保守变体的核酸序列，核酸序列包括经优化以在由宿主细胞如大肠杆菌表达时产生人αS蛋白或保守变体的密码子。已优化密码子以避免在表达的蛋白中氨基酸错掺。还提供了纯化表达的蛋白的方法。
突触核蛋白及其制备使用方法

[发明专利]一种外源表达FLS2蛋白的方法-CN201811280260.3在审
发明人：汤娇;孙亚东;韩志富;柴继杰;石巍 -专利权人：中国农业科学院蜜蜂研究所
申请日： 2018-10-30 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明提供了一种外源表达FLS2蛋白的方法。该方法包括：在pFastBac^TM1的BamH1酶切位点前加入Hemolin信号肽得到pFastBac^TMHem载体；用BamH1和Sal1酶切FLS2基因，采用BamH1和Xho1酶切pFastBac^TMHem载体，酶切后连接，构建外源表达载体；外源表达载体转染昆虫细胞，培养该细胞后，收获细胞和上清，上清液经层析，纯化后获得构象正确的FLS2蛋白，表达量达2.6mg/L。本发明方法克服了现有技术采用原核表达系统无法获得正确构象的FLS2蛋白或采用其他真核表达系统FLS2蛋白表达量低的缺点，提高了构象正确的FLS2蛋白的表达量，节约了成本。
外源表达蛋白构象酶切表达量原核表达系统真核表达系统转染昆虫细胞蛋白表达量细胞技术采用上清液信号肽层析构建位点基因节约收获

[发明专利]一种外源表达PEPR1蛋白的方法-CN201811280271.1在审
发明人：汤娇;孙亚东;韩志富;柴继杰;石巍 -专利权人：中国农业科学院蜜蜂研究所
申请日： 2018-10-30 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供一种外源表达PEPR1蛋白的方法。该方法包括：在pFastBac^TM1的BamH1酶切位点前加入Hemolin信号肽得到pFastBac^TMHem载体；用BamH1和Sal1酶切PEPR1基因，采用BamH1和Xho1酶切pFastBac^TMHem载体，酶切后连接，构建外源表达载体；外源表达载体转染昆虫细胞，培养该细胞后，收获细胞和上清，上清液经层析，纯化后获得构象正确的PEPR1蛋白，表达量达2.24mg/L。本发明克服了现有技术采用原核表达系统无法获得正确构象的PEPR1蛋白或采用其他真核表达系统PEPR1蛋白表达量低的缺点，提高了构象正确的PEPR1蛋白的表达量，节约了成本。
外源表达蛋白构象酶切表达量原核表达系统真核表达系统转染昆虫细胞蛋白表达量细胞技术采用上清液信号肽层析构建位点基因节约收获

[发明专利]基于蛛丝-阳离子多肽融合蛋白的纯化及水下粘附水凝胶的制备方法-CN202210230688.7在审
发明人：钱志刚;刘树安;黄盛晨;夏小霞 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2022-03-09 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C08J3/075 文献下载
摘要：一种基于蛛丝‑阳离子多肽融合蛋白的纯化及水下粘附水凝胶的制备方法，将重组蛛丝蛋白基因与阳离子多肽的基因融合后连接至表达载体pET28a4构建得到重组表达载体，然后将重组表达载体导入表达宿主细胞中，经过发酵表达以及分离纯化后得到高纯度目的蛋白；再将高纯度目的蛋白的溶液与单宁酸溶液交联反应得到水下黏附水凝胶。本发明使用宿主本身的负电膜蛋白OmpF作为纯化介质，能够大量获得高纯度的融合蛋白，通过与单宁酸物理交联制成性能优良的水下粘附水凝胶，可批量纯化且降低成本。
基于蛛丝阳离子多肽融合蛋白纯化水下粘附凝胶制备方法

[发明专利]嗜水气单胞菌外膜蛋白基因原核表达蛋白及其应用-CN201510367203.9在审
发明人：郑宗林;黄朝芳;王广军 -专利权人：郑宗林;黄朝芳
申请日： 2015-06-29 - 公布日： 2015-10-07 - 主分类号： C07K14/195 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种嗜水气单胞菌外膜蛋白基因原核表达蛋白及其应用，所述蛋白将外膜蛋白基因片段克隆入原核表达载体pET-30a得到重组表达载体，将重组表达载体转化大肠杆菌获得重组大肠杆菌，将所述重组大肠杆菌接种于Amp抗性的LB平板培养至OD₆₀₀达0.6时，加入IPTG至终浓度为1.0mmol/L进行诱导表达，经纯化后获得嗜水气单胞菌外膜蛋白基因原核表达蛋白。本发明方法成功构建了嗜水气单胞菌外膜蛋白基因原核表达蛋白，使其可作为对鱼具有保护作用的疫苗，比较研究了嗜水气单胞菌外膜蛋白基因原核表达蛋白pompA在不同FIA作用下对斑点叉尾鮰的免疫效果。
水气单胞菌外膜蛋白基因表达蛋白及其应用

[发明专利]一种具有双表达盒的GS表达载体及其应用-CN202010436157.4在审
发明人：赵丽丽;朱中松;刘忠 -专利权人：鲁南制药集团股份有限公司
申请日： 2020-05-21 - 公布日： 2021-06-22 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高表达细胞株开发中谷氨酰胺合成酶表达载体的构建及应用。本发明所提供的谷氨酰胺合成酶表达载体具有第一表达盒元件，第二表达盒元件，谷氨酰胺合成酶表达元件，氨苄青霉素β内酰胺酶水解酶表达元件，复制起始位点ORI，该载体被命名为PGS‑2，利用该构建的谷氨酰胺合成酶表达载体可同时表达两个蛋白，或者表达一个蛋白的两个亚基，最后进行组装，与现有方法相比具有更好的操作便利性，且蛋白表达量提高了8倍以上。
一种具有表达 gs 载体及其应用

[发明专利]为非甲非乙型肝炎特异性抗原编码的DNA片段，含该DNA片段的表达载体，其转化体及生产该抗原的方法-CN88101758.2无效
发明人：高桥和展;井达郎;上园满;松井理惠;寺西丰;中西重忠;喜多村直实 -专利权人：三菱化成工业株式会社
申请日： 1988-03-31 - 公布日： 1989-03-15 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：本发明提供含感染非甲非乙型肝炎的肝细胞产生的为非甲非乙型肝炎特异抗原蛋白编码碱基顺序的DNA片段，将该DNA片段从该基因启动子下游克隆切点插入的表达载体，将该表达载体引入宿主所得的转化体和生产该特异抗原蛋白的方法该方法包括制造所述表达载体，用该载体转化宿主，培养该转化宿主和收集产生的蛋白。
非甲非乙型肝炎特异性抗原编码 dna 片段表达载体转化生产方法

[发明专利]鲤鱼小肽转运载体蛋白PepT1兔抗血清的制备方法-CN201310084521.5无效
发明人：聂国兴;张建新;刘起丽;闫潇;孙君君 -专利权人：河南师范大学
申请日： 2013-03-18 - 公布日： 2013-07-24 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种鲤鱼小肽转运载体蛋白PepT1兔抗血清的制备方法。本发明的技术方案要点为：鲤鱼小肽转运载体蛋白PepT1兔抗血清的制备方法，包括以下步骤：（1）克隆鲤鱼肠道小肽转运载体蛋白PepT1的基因；（2）构建小肽转运载体蛋白PepT1的基因工程菌；（3）小肽转运载体蛋白PepT1基因工程菌的诱导表达与鉴定；（4）制备小肽转运载体蛋白PepT1抗原；（5）免疫兔子；（6）采血样测定鲤鱼肠道小肽转运载体蛋白PepT1的效价；（7）颈动脉采血制备小肽转运载体蛋白PepT1的兔抗血清本发明采用表达跨膜蛋白的具有抗原决定簇部分基因片段作为抗原蛋白代替全长基因，解决了跨膜蛋白无法表达的难题。
鲤鱼转运载体蛋白 pept1 血清制备方法

[发明专利]鲤鱼糖转运载体蛋白Sglt1兔抗血清的制备方法-CN201310084523.4无效
发明人：聂国兴;张建新;王俊丽;侯彩霞;闫潇;张新胜 -专利权人：河南师范大学
申请日： 2013-03-18 - 公布日： 2013-07-17 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种鲤鱼糖转运载体蛋白Sglt1兔抗血清的制备方法。本发明的技术方案要点为：鲤鱼糖转运载体蛋白Sglt1兔抗血清的制备方法，包括以下步骤：（1）克隆鲤鱼肠道糖转运载体蛋白Sglt1的基因；（2）构建糖转运载体蛋白Sglt1的基因工程菌；（3）糖转运载体蛋白Sglt1基因工程菌的诱导表达与鉴定；（4）制备糖转运载体蛋白Sglt1抗原；（5）免疫兔子；（6）采血样测定鲤鱼肠道糖转运载体蛋白Sglt1的效价；（7）颈动脉采血制备糖转运载体蛋白Sglt1的兔抗血清本发明采用表达跨膜蛋白的具有抗原决定簇部分基因片段作为抗原蛋白代替全长基因，解决了跨膜蛋白无法表达的难题。
鲤鱼转运载体蛋白 sglt1 血清制备方法

[发明专利]一种原核分泌表达载体及其应用-CN200610037146.9有效
发明人：张擎;洪明晃;张文泽;赖文珊;罗东华;胡质毅;谢骏;陈峰;王倩倩;王平 -专利权人：中山大学
申请日： 2006-08-22 - 公布日： 2007-02-07 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种原核分泌表达载体及其应用。本发明的原核分泌表达载体含有双信号肽－伴体蛋白的复合装置，araBAD强启动子和pUC高拷贝复制原点。利用两个geneIII信号肽序列和一个硫氧化还原蛋白序列，该载体能供在高效表达外源基因的同时有效提高表达产物的正确折叠率和水溶性，一步即可得到具生物活性的单体蛋白。本发明适用于重组蛋白的大量生产，对表达二硫键多、水溶性差的活性蛋白尤其适用。
一种分泌表达载体及其应用

[发明专利]一种用于双分子荧光互补研究的表达载体及其应用-CN201510739878.1有效
发明人：言普;周鹏;沈文涛;庹德财;黎小瑛 -专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所
申请日： 2015-11-04 - 公布日： 2018-07-17 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明构建了一套新的用于双分子荧光互补(BiFC)研究的表达载体，载体上整合有荧光蛋白2个片段的表达框架，2个目标蛋白的基因序列能通过一步反应(Golden Gate克隆或闭环Gibson拼接法)同时克隆到载体，分别与荧光蛋白的2个片段融合表达。因此，利用此载体进行BiFC研究时只需构建和向细胞内导入一个载体，极大地方便了植物双分子荧光互补实验的操作。该载体能兼容Golden Gate克隆和闭环Gibson拼接法两种高效的新克隆方法，并且该载体为高拷贝的含T‑DNA序列的植物表达载体，可同时用于植物的瞬时和稳定表达。
分子荧光闭环表达载体荧光蛋白克隆构建拼接植物表达载体互补实验基因序列目标蛋白片段融合稳定表达一步反应高拷贝新克隆整合研究兼容细胞应用

[发明专利]CAR表达载体及其构建方法-CN201610600015.0在审
发明人：曾宪卓;张翼 -专利权人：深圳爱生再生医学科技有限公司
申请日： 2016-07-28 - 公布日： 2016-12-07 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：本发明公开了一种CAR表达载体及其构建方法，其中，所述CAR表达载体包括载体和接入所述载体的CAR，所述CAR包括胞膜外抗原结合区、铰链区和胞内信号传导区，所述胞膜外抗原结合区为用于结合HER2蛋白的chA21scFv本发明CAR表达载体的chA21scFv能够表达抗HER2单克隆抗体，且以HER2蛋白为靶向直接识别并结合肿瘤细胞表面高表达的HER2蛋白，从而活化T细胞而分泌杀伤表达HER2蛋白的肿瘤细胞的细胞因子。
car 表达载体及其构建方法

[发明专利]黑大豆14-3-3j蛋白基因的原核表达载体及其应用-CN201310000498.7无效
发明人：陈丽梅;周磊;郭传龙;李松;王琳 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2013-01-04 - 公布日： 2013-04-24 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开一种黑大豆14-3-3j蛋白基因的原核表达载体pGEX-4T-1-14-3-3j，该载体是含有黑大豆14-3-3j蛋白基因的原核表达载体，是从黑大豆中克隆出14-3-3j基因，用T7启动子、lac(乳糖操纵子)在IPTG诱导下控制它在EcoliBL21中过量表达，合成14-3-3j蛋白并分泌到细胞质，通过SDS-PAGE检测其表达水平，实验结果表明在28℃、1mMIPTG诱导4h时14-3-3j蛋白表达量达到最大；本发明提供的原核表达载体能应用在制备多克隆抗体中，制作的多克隆抗体可以用于检测14-3-3j蛋白表达量和蛋白相互作用的体外验证，为研究14-3-3j蛋白的结构和功能提供可行性基础。
大豆 14 蛋白基因表达载体及其应用

[发明专利]一种水分子通道生物蛋白膜-CN202110724293.8在审
发明人：钱伟;李忠军 -专利权人：南京梅百草生物科技有限公司
申请日： 2021-06-29 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： B01D69/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种水分子通道生物蛋白膜的制备方法，包括用PCR手段在水分子通道蛋白基因下游引入8个组氨酸标签；将所述水分子通道蛋白基因连接到麦芽糖结合蛋白融合载体上，成功构建表达载体；将所述表达载体转入大肠杆菌进行表达，从而得到水分子通道蛋白；通过囊泡融合法将所述水分子通道蛋白包裹在磷脂双层膜中，铺展于纳滤膜上制得水分子通道生物蛋白膜。
一种水分子通道生物蛋白

[发明专利]根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体及构建方法-CN201110373124.0无效
发明人：贾文锁;梁莉艳;赵艳侠;李自超;李金杰;李冰冰 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2011-11-22 - 公布日： 2012-05-02 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明属于植物基因工程领域，特别涉及一种根特异启动子驱动水通道蛋白基因ZMPIP2a表达载体及构建方法。所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因ZMPIP2a表达载体的出发载体为PGreen0229质粒载体，并包含有水稻根特异性启动子基因EXP18-D和水通道蛋白基因ZMPIP2a。因为本发明的表达载体采用水稻根特异性启动子基因EXP18-D做为启动子，驱动水通道蛋白基因ZMPIP2a的表达，所以该表达载体具有特定地改变植物的根部形态、获得相应的抗旱植株潜力：转入该启动子的植株，在同等干旱条件下
特异启动子驱动通道蛋白基因 zmpip2a 表达载体构建方法