本发明公开了一种用于检测与结直肠癌长春新碱耐药相关的miRNA表达的引物、试剂盒、方法及应用，属于肿瘤生物治疗技术领域。本发明首次通过试验证实SEQ ID NO:1所示miRNA序列与长春新碱的耐药性相关，miRNA在长春新碱耐药细胞中高表达、敏感细胞中低表达，因此可以作为肿瘤细胞长春新碱耐药的标志物。根据该标志物设计的引物、试剂盒及检测方法可用于临床判断肿瘤细胞对长春新碱的耐药性，进一步指导临床用药并实现精准治疗，提高疗效，降低副作用。本发明为设计肿瘤细胞长春新碱耐药药物提供了新的靶点，可用于直接开发拮抗肿瘤细胞长春新碱耐药性的药物。
本发明涉及肿瘤耐药基因技术领域，特别涉及一种乐伐替尼耐药基因DUSP9、其筛选方法及应用，DUSP9的基因的序列为SEQ ID NO：1。其筛选方法包括以下步骤：进行预实验，获得sgRNA文库的最佳MOI，确定乐伐替尼的浓度；进行感染Cas9文库实验，得到稳定株；稳定株加入乐伐替尼处理，通过PCR扩增和高通量测序，分析sgRNA的富集情况；筛选乐伐替尼耐药基因；有效靶基因对肝癌细胞功能表型及介导乐伐替尼耐药的作用验证。本发明通过CRISPR/Cas9全基因文库筛选得到乐伐替尼的耐药基因，为今后减少乐伐替尼耐药性提供了理论依据，为乐伐替尼的临床应用提供了新的耐药靶点，为临床合理用药提供指导。
