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[发明专利]一种促进猪卵母细胞体外成熟的培养液-CN201911373672.6有效
发明人：苗义良;刘鑫;张霞;周吉隆;李哲坤;郝宇晨 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-12-26 - 公布日： 2021-09-24 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进猪卵母细胞体外成熟的培养液，培养液以不含HEPES的M199培养液为基础培养液，还添加有猪卵泡液、L‑半胱氨酸、丙酮酸钠、表皮生长因子、胰岛素、促性腺激素、绒毛膜促性激素和WNT5A使用该培养液对猪卵母细胞进行体外培养，可有效提高卵母细胞体外成熟的效率和质量，由此获得的成熟卵母细胞进行猪体外受精和体细胞核移植胚胎的生产，其囊胚发育率和质量也得到显著提高。
一种促进猪卵母细胞体外成熟培养液

[发明专利]黄杉属植物通过体细胞胚胎发生的繁殖方法-CN202010969083.0有效
发明人：孔立生;张金凤;赵健;高英;崔莹;李珊珊;范英明 -专利权人：北京林业大学;神舟绿鹏农业科技有限公司
申请日： 2020-09-15 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种黄杉属植物通过体细胞胚胎发生的繁殖方法，包括对黄杉属植物的无菌外植体进行胚性组织诱导培养、增殖培养、胚性组织的调整培养、体细胞胚胎(体胚)成熟培养、成熟体胎的萌发培养、转苗培养。通过本发明的方法，首次通过诱导体胚发生的途径获得了稳定的华东黄杉胚性细胞株以及大量的成熟体胚，进而获得完整的体胚植株。用本发明的方法，可以在相对短的时期内生产大量的华东黄杉体胚苗。
黄杉属植物通过体细胞胚胎发生繁殖方法

[发明专利]牛体外受精胚胎培养的方法-CN201810576762.4有效
发明人：王小武;郭晶;王娜;郝少强;赵明礼;马毅;郭春明 -专利权人：天津博裕力牧科技有限公司
申请日： 2018-06-07 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明涉及牛体外受精胚胎培养的方法。本发明方法包括如下步骤：卵母细胞的采集和体外成熟；体外受精；胚胎体外培养及保存。在体外受精时，成熟的COCs在本发明受精培养液中培养，在胚胎体外培养时，将胚胎周围的颗粒细胞用剥卵针去除干净，放入胚胎培养液中培养，培养完毕后将可用胚胎在冷冻液中液氮冷冻保存。
体外受精胚胎培养方法

[发明专利]模拟机体内环境的自动化细胞培养装置-CN201110416555.0有效
发明人：汪华;张雁 -专利权人：汪华
申请日： 2011-12-13 - 公布日： 2013-06-19 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本发明属于细胞培养技术领域。具体公开模拟机体内环境细胞自动化培养装置，包括层流无菌的密封室所述密封室内设有内环境模拟组织器官培养装置和目的细胞诱导培养装置。该装置可模拟培养胚胎干细胞的低氧低渗环境、生殖细胞发育成熟过程中的睾丸内环境，诱导T细胞发育成熟的胸腺环境、诱导神经干细胞分化的脑脊液环境、以及相应干细胞分化发育成熟的组织器官环境如肝脏、胰脏、骨髓和肿瘤等内环境，诱导培养出特定的高质量细胞满足细胞基础研究和应用需要，同时模拟的体内环境也为研究机体细胞生长、分化和成熟机制奠定了基础，有利于提高细胞培养质量，显著增加细胞学研究的重复性，节约细胞培养成本，加快细胞培养技术的临床转化与应用
模拟机体内环境自动化细胞培养装置

[发明专利]抑制发芽/生根的大麦成熟胚组织培养法及所用培养基-CN201210044472.8有效
发明人：华为;杨建明;汪军妹;朱靖环;贾巧君;尚毅;林峰;顾玉坤 -专利权人：浙江省农业科学院
申请日： 2012-02-26 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种大麦成熟胚离体培养基，包括诱导愈伤培养基、分化培养基和生根壮苗培养基。本发明还同时公开了利用上述大麦成熟胚离体培养基所进行的有效抑制发芽/生根的大麦成熟胚组织培养方法，包括以下步骤：1)、种子经消毒灭菌后，刮取胚作为离体胚接种到诱导愈伤培养基上；2)、将接种在诱导愈伤培养基上的离体胚放入22～26℃的培养箱中黑暗培养；3)、将所得的愈伤组织转到分化培养基上，22～26℃光照培养直至愈伤组织上长出2～3片的叶子；4)、将绿苗转到生根壮苗培养基上，22～26℃光照培养，直至绿苗长出≥2cm的根；5)、将绿苗在室内放置1～2天，洗去根上的培养基，得可移栽的苗。
抑制发芽生根大麦成熟组织培养所用培养基

[发明专利]一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法-CN202110411981.9有效
发明人：邓伦秀;吴高殷;刘晓慧;陈锐;龙海燕;徐超然 -专利权人：贵州省林业科学研究院
申请日： 2021-04-16 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明申请属于虎舌红植物组织培养技术领域，具体公开了一种虎舌红成熟胚愈伤诱导和分化及不定芽增殖方法，该方法包括成熟果实的获取、种子的预处理、种子消毒、胚的获取、愈伤组织诱导、分化和不定芽增殖培养。在超净工作台上，成熟种子经消毒处理，取出胚接种到培养基上，胚污染率为0；培养60～80天，愈伤组织诱导率为90％，愈伤组织分化率为48％；将分化的不定芽接种到增殖培养基中继续培养45～55天，不定芽增殖率可达本试验为虎舌红培育提供了一种高效的繁殖方法，以成熟胚为外植体，污染率低、诱导率高，培育周期短，不定芽数量多，为虎舌红繁殖、新品种开发和优良品种的保护奠定了基础。
一种虎舌红成熟胚愈伤诱导分化不定增殖方法

[发明专利]一种快速提高颗石藻内β-葡聚糖含量的培养方法-CN201110419070.7无效
发明人：周成旭;田甜;严小军;刘宝宁;陈海敏;骆其君 -专利权人：宁波大学
申请日： 2011-12-15 - 公布日： 2012-06-27 - 主分类号： C12N1/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速提高颗石藻内β-葡聚糖含量的培养方法，包括将颗石藻苗接种于盐度为25～30‰的海水培养液，在温度为15～25℃，光照强度为2000～5000Lux培养条件下培养，在采收颗石藻成熟体前5～10小时，在海水培养液中添加浓度为5g/L的磷酸二氢钠溶液，海水培养液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1000:0.8～1.2。这样在采收前最后5～10小时，是颗石藻成熟体的细胞密度最大时期，添加磷酸二氢钠使颗石藻成熟体快速代谢，β-葡聚糖增殖迅速，累积率高，而5～10小时就采收，消耗也较少，颗石藻成熟体内的β-葡聚糖含量就较大
一种快速提高颗石藻内聚糖含量培养方法

[发明专利]一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法-CN201711293931.5有效
发明人：石贵阳;刘龙;陈坚;胡志杰;蒋建伟;蒋小东;金赛;孙福新;李由然;周东姣 -专利权人：江苏国信协联能源有限公司;江南大学
申请日： 2017-12-08 - 公布日： 2020-06-05 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种黑曲霉种子培养及其制备柠檬酸的方法，所述方法包括如下步骤：(1)取培养成熟的黑曲霉麸曲孢子，得到分散孢子悬液；(2)培养步骤(1)中的分散孢子悬液，得到发芽孢子；(3)发芽孢子重新分散，种子罐内培养，得到成熟种子液；(5)成熟种子液转至发酵罐内培养发酵，得到柠檬酸发酵液。
一种曲霉种子培养及其制备柠檬酸方法

[发明专利]促进针叶树体细胞胚成熟的培养基和方法-CN200410061616.6无效
发明人：普拉莫德·古普塔;黛安娜·霍尔姆斯特伦;博尼·拉松 -专利权人：韦尔豪泽公司
申请日： 2004-06-23 - 公布日： 2005-02-02 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：一方面，本发明提供制备成熟针叶树体细胞胚的方法。本发明的方法包含如下步骤：(a)在含有低于0.5％结冷胶的发育培养基中或之上培养前子叶针叶树体细胞胚以形成子叶针叶树体细胞胚；和(b)在含有大约0.5％到大约1.5％结冷胶的成熟培养基中或之上培养步骤(在一些具体实施方式中，成熟培养基进一步含有蔗糖和/或脱落酸。
促进针叶树体细胞成熟培养基方法

[发明专利]一种哺乳动物胚胎体外培养方法-CN202010560940.1有效
发明人：邱寒峰;吴婷;徐雅萍;董信阳 -专利权人：广州华珍生物科技有限公司
申请日： 2019-11-01 - 公布日： 2021-12-21 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种哺乳动物胚胎体外培养方法，包括以下步骤：（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养20‑24小时，获得成熟的羊卵母细胞；（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养18‑24小时，进行受精，获得早期羊胚胎；（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在38‑39℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，上述培养箱包括培养室、室门、与该培养室相连通的气体浓度调节室；所述培养室内具有多个培养仓，多个培养仓内分别上设有培养基放置架和隔断装置。本发明的培养箱内环境的稳定性，保障胚胎的存活率。
一种哺乳动物胚胎体外培养方法

[发明专利]一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法-CN201911059937.5有效
发明人：邱寒峰;吴婷;徐雅萍;董信阳 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-11-01 - 公布日： 2020-07-24 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高哺乳动物胚胎体外存活率的培养方法，包括以下步骤：（1）从母羊身上取得羊卵母细胞置入成熟培养液内，在培养箱内培养20‑24小时，获得成熟的羊卵母细胞；（2）将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在培养箱内培养18‑24小时，进行受精，获得早期羊胚胎；（3）将受精后的羊胚胎用TCM199培养液进行反复冲洗，之后放入羊胚胎体外培养液中，并置入培养箱中进行胚胎体外培养，该培养箱内温度维持在38‑39℃，气体浓度维持在5%CO2；其中，上述培养箱包括培养室、室门、与该培养室相连通的气体浓度调节室；所述培养室内具有多个培养仓，多个培养仓内分别上设有培养基放置架和隔断装置。本发明的培养箱内环境的稳定性，保障胚胎的存活率。
一种提高哺乳动物胚胎体外存活率培养方法

[发明专利]一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法-CN201810828128.5有效
发明人：崔海峰;叶子弘;张雅芬;俞晓平;夏文强;付贤树;赵金兰 -专利权人：中国计量大学
申请日： 2018-07-25 - 公布日： 2021-10-12 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，按下列步骤进行：1）幼胚的获得；2）萌发芽生根培养；3）培养苗壮苗培养；4）再生植株移栽。本发明通过在野茭结实初期进行采收，避免了成熟后的种子脱落，对未成熟种子采用幼胚培养的方法处理，诱导获得大量再生植株，通过调节培养基配方，确定最佳培养方案，茭白再生苗获得率高达到96.5%。
一种利用茭白进行再生诱导方法

[发明专利]一种研究卵母细胞体外成熟中卵丘细胞基因功能的方法-CN201910315164.6在审
发明人：曹祖兵;童旭;刘传江;张丹丹;高迪;许腾腾;王怡青;张运海 -专利权人：安徽农业大学
申请日： 2019-04-18 - 公布日： 2019-07-16 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种研究卵母细胞体外成熟中卵丘细胞基因功能的方法，包括如下步骤：成熟碟的制备：取20.83uL成熟液于200uL离心管中，再加入1uL慢病毒，吹打混匀；将混匀后的成熟液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h；慢病毒转染COCs：从卵泡中的挑选出COCs，再用成熟液IVM将COCs清洗三遍；把清洗好的COCs转染30‑50h，本发明的慢病毒转染卵丘‑卵母细胞复合物来发明卵母细胞成熟中卵丘基因功能的方法，通过慢病毒转染实现干扰卵丘细胞中目的基因或蛋白的表达，有效地解决卵丘细胞不能进行显微注射的问题，又能很好地发挥卵丘基因在卵母细胞成熟过程中发挥的作用。
卵丘细胞慢病毒转染基因功能成熟液卵丘培养皿卵母细胞成熟混匀卵母清洗成熟矿物油卵母细胞目的基因显微注射吹打复合物离心管培养箱有效地卵泡制备蛋白基因研究平衡

[发明专利]毕赤酵母制备人白细胞介素29成熟肽的方法-CN201110413183.6无效
发明人：陈伟;郑海军;于明磊;郁心;邬敏辰;吴静 -专利权人：江南大学
申请日： 2011-12-13 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种人白细胞介素29(hIL-29)成熟肽的制备方法及表达hIL-29成熟肽的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从健康人外周血单个核细胞经反转录PCR得到hIL-29成熟肽的编码基因；3)构建含有hIL-29成熟肽编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达hIL-29成熟肽；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化hIL-29成熟肽。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达天然型hIL-29成熟肽，适用于工业化制备人白细胞介素29。
酵母制备白细胞 29 成熟方法

[发明专利]一种生产犏牛可控性别体外胚胎的方法-CN201310093517.5无效
发明人：安添午;罗晓林;杨平贵;官久强;吴伟生;赵洪文;毛德才;谢荣清;李华德;周明亮;陈明华;蒋世海 -专利权人：四川省草原科学研究院
申请日： 2013-03-22 - 公布日： 2013-07-24 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产犏牛可控性别体外胚胎的方法，包括以下步骤：将牦牛卵巢去除周围结缔组织并清洗后，选取卵母细胞并洗涤；将洗涤后的卵母细胞转入添加有血清、激素、卵泡液和Hepes缓冲液的培养皿中，再将培养皿放入培养箱中进行成熟培养；取普通牛的含X或Y染色体的精子，通过Percoll梯度分离液将精液中的死精子与活精子分开；将培养成熟的卵母细胞从Hepes缓冲液中拣出，用受精液洗涤后将含X或Y染色体的精子加入到含有卵母细胞的受精微滴中，放入培养箱中进行体外受精培养；受精后进行囊胚成熟处理；成熟时回收囊胚，进行胚胎移植或贮存。
一种生产犏牛可控性别体外胚胎方法

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