本发明提供一种运用重组唾液酸酶转化多唾液酸神经节苷脂制备单唾液四己糖神经节苷脂的方法,包括以下步骤:1)提供一种游离的重组唾液酸酶,所述重组唾液酸酶是由SEQ ID NO:1所示的碱基序列编码的蛋白;以及2)将步骤1)中的重组唾液酸酶与多唾液酸神经节苷脂混合,以将所述多唾液酸神经节苷脂(GLS)转化为单唾液四己糖神经节苷脂(GM1)。本发明首次通过全合成唾液酸酶的全长基因,在大肠杆菌中成功实现了唾液酸酶的可溶性表达,该重组唾液酸酶比活高,制备成本低,并且该方法通过采用透析原位分离产物唾液酸可进一步解除唾液酸的抑制作用,促进反应向产物方向进行