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[发明专利]南方根结线虫吞食寡孢节丛孢细胞外囊泡的方法-CN202211282934.X在审
发明人：张克勤;周亮;王芯;康佳磊 -专利权人：云南大学
申请日： 2022-10-19 - 公布日： 2023-01-24 - 主分类号： C12N3/00 文献下载
摘要：本发明公开了南方根结线虫吞食寡孢节丛孢细胞外囊泡的方法，涉及分子微生物学技术领域，其技术要点为：包括以下步骤：S1、寡孢节丛孢Arthrobotrysoligospora的培养；S2、寡孢节丛孢细胞外囊泡的获得及表征分析；S3、捕食线虫真菌寡孢节丛孢细胞外囊泡的荧光标记；S4、南方根结线虫吞食寡孢节丛孢细胞外囊泡。本发明首次报道了南方根结线虫可吞食寡孢节丛孢细胞外囊泡，这对于理解食线虫真菌与线虫互作机制具有重要意义，同时在线虫生物防治领域也展现出了潜在的应用价值。
南方线虫吞食寡孢节丛孢细胞外囊泡方法

[发明专利]一种提高寡孢节丛孢捕食器官数量的方法-CN201510129251.4有效
发明人：梁连铭;刘志恒;张克勤 -专利权人：云南大学
申请日： 2015-03-24 - 公布日： 2017-10-10 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高捕食线虫真菌寡孢节丛孢产生捕食器官的方法，属于应用微生物学领域。本发明通过在寡孢节丛孢孢子悬液中加入硝酸钠，寡孢节丛孢孢子悬液中至终浓度20mM，以此来提高寡孢节丛孢捕食器官数量和杀线虫能力。本发明的有益效果在于在寡孢节丛孢孢子悬液中加入NaNO3后，寡孢节丛孢产生大量捕食器官，杀线虫能力显著提高，在加入线虫12h时，线虫死亡率达到了85.88％；在加入线虫24h时，添加硝酸钠的比不添加的平板上产生的捕食器官数量多了
一种提高寡孢节丛孢捕食器官数量方法

[发明专利]一种诱导寡孢节丛孢产生捕食器官的方法-CN202011454864.2有效
发明人：王芯;徐娅;张克勤;李国红 -专利权人：云南大学
申请日： 2020-12-09 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： C12N3/00 文献下载
摘要：本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种诱导寡孢节丛孢产生捕食器官的方法。所述方法包括以下步骤：寡孢节丛孢孢子的制备；将制备得到的孢子加入WA培养及中，20‑30℃培养36‑48h，加入丁基‑beta‑d‑吡喃葡萄糖苷，20‑30℃继续培养。采用本发明方法可使寡孢节丛孢产生大量的捕食器官。本发明方法简单，易于操作，利于推广应用。
一种诱导寡孢节丛孢产生捕食器官方法

[发明专利]捕食线虫真菌寡孢节丛孢的STR分子标记-CN202111039221.6有效
发明人：周端咏;张颖;徐建平;王瑞瑞;李海霞;李烁烁 -专利权人：云南大学
申请日： 2021-09-06 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了捕食线虫真菌寡孢节丛孢的STR分子标记，具体涉及DNA分子标记技术领域，由20个STR分子标记组合。本发明通过在已经获得寡孢节丛孢基因组数据的基础之上，利用常规生物信息学方法，在基因组水平上检测其STR的分布，进行引物设计，利用分离自不同生长环境的寡孢节丛孢菌株样品，选取部分引物进行初筛、复筛后，得到
捕食线虫真菌寡孢节丛孢 str 分子标记

[发明专利]具有杀线虫功能的寡孢节丛孢基因工程菌株及其应用-CN201410138594.2有效
发明人：梁连铭;杨金奎;莫媛媛;张克勤 -专利权人：云南大学
申请日： 2014-04-08 - 公布日： 2015-01-21 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种具有杀线虫功能的食线虫真菌寡孢节丛孢基因工程菌株及其应用，属生物农药技术领域。本发明的生产菌株为：寡孢节丛孢基因工程菌株（Arthrobotrys oligosporaΔMad1），保藏号为CCTCC M 2013439。寡孢节丛孢基因工程菌株在制备用于防治线虫制剂中的应用。本发明的有益效果在于：1、寡孢节丛孢基因工程菌株与出发菌株具有相同的生长速率和形态。其与野生菌株的不同之处在于当其培养在在含有0.1%-0.5%的硝酸钠或者0.1%-0.
具有线虫功能寡孢节丛孢基因工程菌株及其应用

[发明专利]一种利用秀丽隐杆线虫分泌的细胞外囊泡诱导寡孢节丛孢产生捕食器官的方法-CN202110914912.X有效
发明人：刘晓英;李娟;张克勤 -专利权人：云南大学
申请日： 2021-08-10 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用线虫细胞外囊泡诱导捕食线虫真菌产生捕食器官的方法，包括如下步骤：(1)线虫的培养；(2)线虫细胞外囊泡的获得及线虫细胞外囊泡表征分析；(3)捕食线虫真菌寡孢节丛孢Arthrobotrys oligospora的培养；(4)利用线虫细胞外囊泡诱导寡孢节丛孢捕食器官的产生。本发明通过提取秀丽隐杆线虫的细胞外囊泡(Extracellular vesicles，EVs)，并利用获得的EVs成功诱导寡孢节丛孢产生捕食器官，说明线虫分泌的EVs中包含有诱导捕食线虫真菌产生捕食器官的物质
一种利用秀丽线虫分泌细胞外囊泡诱导寡孢节丛孢产生捕食器官方法

[发明专利]嗜根寡营养单胞菌及其环二肽代谢物的应用-CN201310008528.9无效
发明人：李蕾;罗俊;张克勤;马明川 -专利权人：云南大学
申请日： 2013-01-10 - 公布日： 2013-05-08 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种嗜根寡营养单胞菌及其环二肽代谢物的应用，属于微生物农药技术领域。发明采用的嗜根寡营养单胞菌（Stenotrophomonas rhizophila） WQS37菌株已于2012年11月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏号：CGMCC No：6777将嗜根寡营养单胞菌通过培养及分离获得环二肽代谢物；嗜根寡营养单胞菌及其环二肽代谢物与少孢节丛孢混合，作为诱导少孢节丛孢快速形成大量的捕食器官的应用。本发明的嗜根寡营养单胞菌和其环二肽代谢物能快速诱导少孢节丛孢在土壤中形成大量的捕食器官，有效的捕食线虫，为开发捕食线虫真菌生物菌剂提供新的思路。
嗜根寡营养单胞菌及其二肽代谢物应用

[发明专利]一种复合微生物制剂及其在防治根结线虫中的应用-CN201810208798.7有效
发明人：陆平丰;朱金华;吕奇磊;邵全民;吕长增 -专利权人：山东蒙德尔生物科技有限公司
申请日： 2018-03-14 - 公布日： 2021-05-28 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于微生物技术领域，公开了一种复合微生物制剂，其包括苏云金芽孢杆菌，球形芽孢杆菌，寡孢节丛孢菌，吸水链霉菌。本发明复合微生物制剂杀虫效果好，能够有效地防治根结线虫，应用前景广阔。
一种复合微生物制剂及其防治线虫中的应用

[发明专利]一种G418在少孢节丛孢菌中遗传转化筛选体系的建立方法-CN202110642739.2在审
发明人：王永中;彭慧;盛康亮;汪静敏;孔小卫 -专利权人：安徽大学
申请日： 2021-06-09 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了在少孢节丛孢菌中建立了一种新的遗传转化筛选体系，将有利于该真菌遗传转化体系的多层次应用。该方法包括如下步骤：首先将G418编码的对应氨基酸序列根据少孢节丛孢菌密码子偏好性进行密码子优化；将优化后的DNA序列在5’加上Ptef，3’加上Ttef，接着连接在pUC57载体上进行合成，获得Ptef‑G418‑Ttef的DNA模板；在使用时根据实验要求设计特异性引物进行PCR合成使用；使用同源重组‑原生质体转化法将G418导入少孢节丛孢菌。本发明为少孢节丛孢菌增加了一种新的抗性选择标记，可使原来对G418敏感的少孢节丛孢菌对其产生抗性，可对少孢节丛孢菌进行遗传基因操作，为研究少孢节丛孢菌的基因功能带来了巨大方便，而且费用低廉。
一种 g418 少孢节丛孢菌中遗传转化筛选体系建立方法

[发明专利]AOL-S00006g439基因在调控少孢节丛孢菌产捕器中的应用-CN202210220835.2有效
发明人：王芯;郑喜;田梦青;张克勤 -专利权人：云南大学
申请日： 2022-03-08 - 公布日： 2023-01-13 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明涉及微生物技术领域，具体涉及AOL‑S00006g439基因在调控少孢节丛孢产捕器中的应用。本发明首次发现少孢节丛孢中AOL‑S00006g439基因可影响捕器的形成，敲除该基因后少孢节丛孢无需线虫、蛔苷、氨、尿素等诱导，可自发生产大量捕器且能够有效捕食线虫，通过此基因工程手段对少孢节丛孢进行改造使其自发产生捕器成为可能
aol s00006g439 基因调控少孢节丛孢菌产捕器中的应用

[发明专利]一种构建自发产生捕食器官的少孢节丛孢的方法-CN202211282932.0在审
发明人：张克勤;周亮;王芯;何智伟 -专利权人：云南大学
申请日： 2022-10-19 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明提供了一种构建自发产生捕食器官的少孢节丛孢的方法，属于分子生物学技术领域，所述方法包括：将启动子、目的基因、GFP序列、潮霉素筛选标记和终止子依次连接后整体构建于pCE‑Zero载体，后采用引物1进行PCR扩增,得到荧光转化片段；制备少孢节丛孢原生质体，将所述荧光转化片段转化至所述少孢节丛孢原生质体中；筛选出阳性转化子。通过该方法获得的少孢节丛孢能够自发产生捕食器官，对线虫的响应大大提前，对线虫具有更好的防治效果。
一种构建自发产生捕食器官少孢节丛孢方法

[发明专利]一种短波单胞菌在诱导少孢节丛孢产生捕食器官中的应用-CN202211426008.5在审
发明人：李国红;孙永香;邓晓彤;张克勤 -专利权人：云南大学
申请日： 2022-11-14 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一种短波单胞菌在诱导少孢节丛孢产生捕食器官中的应用，属于微生物技术领域，所述短波单胞菌于2019年12月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.19122将短波单胞菌的发酵液与少孢节丛孢的孢子悬液进行混合培养，能够诱导少孢节丛孢产生大量捕食器官，为植物寄生线虫的防治提供了一种新的途径。本发明还提供了一种短波单胞菌在诱导少孢节丛孢产生捕食器官中的应用。
一种短波单胞菌诱导少孢节丛孢产生捕食器官中的应用

[发明专利]副氧化微杆菌在诱导少孢节丛孢产生捕食器官中的应用及方法-CN202011454872.7有效
发明人：李国红;郑桥妹;王芯;张克勤 -专利权人：云南大学
申请日： 2020-12-09 - 公布日： 2022-09-02 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明属于微生物技术领域，具体涉及副氧化微杆菌在诱导少孢节丛孢产生捕食器官中的应用及方法。本发明所述方法包括副氧化微杆菌(Microbacterium paraoxydans)发酵上清液的制备；少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)的孢子悬液的制备；将副氧化微杆菌发酵液的上清液与制备得到的孢子悬液混匀本发明首次发现副氧化微杆菌的发酵液可有效诱导少孢节丛孢产生捕食器官，本发明采用副氧化微杆菌的发酵液诱导少孢节丛孢产生捕食器官的方法更有利于推广应用，为生物防治线虫的有效实施提供可能。
氧化杆菌诱导少孢节丛孢产生捕食器官中的应用方法

[发明专利]一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法-CN202211339314.5在审
发明人：王芯;周亮;张克勤;何智伟 -专利权人：云南大学
申请日： 2022-10-29 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明提供了一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法，包括：筛选出NrsR对应的核苷酸序列；将所述NrsR的抗性基因的5’端加上启动子序列Ptef，3’端加上终止子序列Ttef，获得Ptef‑NrsR‑Ttef的DNA序列；以少孢节丛孢菌基因组为模板，PCR扩增DNA序列5’UTR和3’UTR，将DNA序列5’UTR、Ptef‑NrsR‑Ttef和3’UTR序列连接至pUC19载体，后导入少孢节丛孢菌中，筛选得到转化子该方法以NrsR的抗性基因为少孢节丛孢菌的抗性筛选标记，解决了因该菌遗传转化的选择性标记不足而制约基因功能研究的问题。
一种少孢节丛孢菌遗传转化筛选体系建立方法

[发明专利]Aoz1基因双启动子的重组少孢节丛孢菌及其制备方法-CN201810227752.X在审
发明人：孟庆玲;乔军;贡莎莎;黄运福;钟文强;陈双庆;刘昱成;张星星;蔡扩军;王熙凤;张凯;陈英 -专利权人：石河子大学
申请日： 2018-03-20 - 公布日： 2018-09-07 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种防治由线形动物门线虫纲所引起起的反刍动物消化道线虫病的Aoz1基因双启动子的重组少孢节丛孢菌及其制备方法，本发明通过釆用染色体DNA步移技术克隆了少孢节丛孢菌Aoz1基因启动子，利用根癌农杆菌介导的真菌转化技术构建了高效表达Aoz1基因双启动子的重组少孢节丛孢菌。与非重组的母源少孢节丛孢菌株相比，本发明所获得的菌株具有良好的遗传稳定性，其Aoz1基因转录水平增强，捕食线虫活性提高，为反刍动物消化道线虫病生物防控制剂的研发提供了一个高效的基因工程菌株。
孢菌双启动子反刍动物消化道线虫制备基因根癌农杆菌介导基因工程菌株基因转录水平基因启动子线形动物门遗传稳定性染色体DNA 传统转化高效表达技术构建技术克隆受体材料稳定遗传遗传转化真菌转化转化效率控制剂线虫纲转化子孢菌株捕食步移菌株母源线虫研发与非瓶颈防治

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