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[发明专利]具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株、筛选方法、重组工程菌表达重组蛋白的制备方法-CN201910598485.1有效
发明人：刘霆 -专利权人：成都英普博集生物科技有限公司
申请日： 2019-07-04 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株、筛选方法、重组工程菌表达重组蛋白的制备方法，属于大肠杆菌菌株技术领域，筛选方法包括以下步骤：诱变过程、加压培养过程以及传代稳定性检测过程，诱变过程、加压培养过程以及传代稳定性检测过程形成一次完整的筛选过程，重复N次筛选过程得到纯化的具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株；其中：N为自然数，第N次筛选过程中被诱变的菌株为第N+1具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株且加压培养的噬菌体为第N+1噬菌体；该具有噬菌体抗性的大肠杆菌菌株N+1种噬菌体均具有抗性，不受这N+1种噬菌体的影响，因此不需要定期对设备、环境消毒或更换不同的大肠杆菌宿主，节约生产成本和提高了生产效率。
具有噬菌体抗性大肠杆菌菌株筛选方法重组工程表达蛋白制备

[发明专利]一种重组肉毒杆菌神经毒素及其制备方法和应用-CN202211539717.4在审
发明人：王师亮;王江田;张彦军;刘应康 -专利权人：海雅美生物技术（珠海）有限公司
申请日： 2022-12-02 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C07K14/33 文献下载
摘要：一种重组肉毒杆菌神经毒素及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域，重组肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。本发明的一种重组肉毒杆菌神经毒素，其插入外源蛋白酶识别位点，有效提高对单链多肽的切割效率，得到具有较高生物活性的双链形式BoNT/A。本发明的一种双链式肉毒杆菌神经毒素的制备方法，通过高效切割所述的重组肉毒杆菌神经毒素制得双链式肉毒杆菌神经毒素。进一步地，在大肠杆菌中定量等比表达单链形式重组肉毒杆菌神经毒素和外源蛋白酶，外源蛋白酶可在大肠杆菌中切割单链形式重组肉毒杆菌神经毒素产生活性形式的双链式肉毒杆菌神经毒素，从而实现利用大肠杆菌进行一步生产
一种重组杆菌神经毒素及其制备方法应用

[发明专利]一种高产乳酰-N-四糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用-CN202210573394.4在审
发明人：沐万孟;张文立;李泽宇;朱莺莺 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-05-24 - 公布日： 2022-09-02 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种高产乳酰‑N‑四糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明以前期研究中获得的高产乳酰‑N‑三糖II的重组大肠杆菌为出发菌株，并在该大肠杆菌基因组上整合有单拷贝的galE，通过质粒组合优化表达lgtA、pF和galE，并通过CRISPR‑Cas9基因编辑系统在大肠杆菌宿主基因组上敲除ugD，以缓解中间产物的代谢分流，同时加强产物合成过程中辅因子的再生与循环，进一步提高乳酰‑N‑四糖的产量，在摇瓶发酵实验过程中，重组大肠杆菌生产乳酰‑N‑四糖的能力为6.16g/L，在5L发酵罐中，乳酰
一种高产重组大肠杆菌构建方法应用

[发明专利]一株异源表达腈水合酶的大肠杆菌重组菌及其应用-CN201811284566.6在审
发明人：周哲敏;刘中美;周丽;蓝瑶;崔文璟;郭军玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-10-31 - 公布日： 2019-01-22 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株异源表达腈水合酶的大肠杆菌重组菌及其应用，属于生物工程领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高腈水合酶酶活的大肠杆菌重组菌株，将重组菌株高密度发酵，以烟腈或丙烯腈为底物，进行全细胞催化反应制备烟酰胺或丙烯酰胺。
大肠杆菌重组菌丙烯酰胺异源表达腈水合酶烟酰胺生物工程领域重组大肠杆菌高密度发酵安全清洁催化反应催化效率分离纯化化学生产重组菌株丙烯腈全细胞水合酶终产物产率底物高腈构建酶法酶活烟腈生产工艺制备应用

[发明专利]一种重组人源胶原蛋白及其生产方法-CN201210482543.2有效
发明人：杨霞;陆路 -专利权人：杨霞;陆路
申请日： 2012-11-26 - 公布日： 2013-05-29 - 主分类号： C07K14/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人源胶原蛋白及其生产方法，属于基因工程技术领域。一种重组人源胶原蛋白，结构为单链结构，基本重复单元为gergapgfrgpagpngipgekgpagergap，为人胶原蛋白III型肽段，末端序列为GPPGPCCGGG，为人胶原蛋白II型肽段。生产步骤为：大肠杆菌基因工程菌的构建；大肠杆菌基因工程菌的发培养；重组人源胶原蛋白的诱导和表达；重组人源胶原蛋白的纯化。本发明采用大肠杆菌表达系统，适于大规模放大，生产成本低，产量高。
一种重组胶原蛋白及其生产方法

[发明专利]一套将质粒表达系统经优化重组到大肠杆菌染色体的方法-CN201610609685.9有效
发明人：昌增益;刘洋;余家钰 -专利权人：北京大学
申请日： 2016-07-28 - 公布日： 2019-06-28 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术和合成生物学领域，具体公开了一套将质粒上的表达系统经过优化无痕插入染色体从而得到完全替代原质粒功能的重组大肠杆菌构建方法，本发明寻找到一个普遍存在的大肠杆菌染色体位置(insH11基因本发明还提供了一套无痕在此位置插入外源基因的重组大肠杆菌的构建方法、相关重组菌株和基因重组质粒。
一套质粒表达系统优化重组大肠杆菌染色体方法

[发明专利]一种高密度发酵制备司美鲁肽前体的方法-CN202111059010.9有效
发明人：曹海燕;连婕妮;林兆生;朱志伟;王惠;王洪宇 -专利权人：北京惠之衡生物科技有限公司;吉林惠升生物制药有限公司
申请日： 2021-09-10 - 公布日： 2022-01-07 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于重组大肠杆菌高密度发酵生产司美鲁肽前体的方法。针对目前发酵生产司美鲁肽表达量低的问题，本发明通过在制备的用于表达司美鲁肽前体的重组大肠杆菌的高密度发酵培养基中显著提高Mg离子浓度，提升发酵培养的诱导OD值至150以上，显著提高了重组大肠杆菌发酵OD值和包涵体菌体生物量，实现了重组工程菌的高密度发酵效果，显著增加了司美鲁肽前体表达量。
一种高密度发酵制备司美鲁肽前体方法

[发明专利]高产核黄素大肠杆菌工程菌株及构建方法-CN202110807916.8在审
发明人：陈涛;刘双;户文亚;王智文 -专利权人：天津大学
申请日： 2021-07-16 - 公布日： 2021-10-29 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了高产核黄素大肠杆菌工程菌株及构建方法，包括如下步骤：(1)制备prs+purF核酸片段：获得EC‑RF 01菌株：(2)将步骤(1)得到的prs+purF核酸片段通过λ‑Red基因重组的方法整合到大肠杆菌EC‑Rib 02基因组上，通过阿拉伯糖诱导的方法，消除掉基因重组过程中引入的四环素抗性基因，得到高产核黄素大肠杆菌工程菌株EC‑RF 01。本发明的高产核黄素大肠杆菌工程菌株的核黄素产量高，生产周期短，节省能源，底物的利用率较高。
高产核黄素大肠杆菌工程菌株构建方法

[发明专利]一种制备重组大肠杆菌发酵生产丁二酸的方法-CN201110055042.1无效
发明人：姜岷;马江锋;陈可泉;郭亭;韦萍;欧阳平凯 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2011-03-09 - 公布日： 2011-09-07 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种制备重组大肠杆菌发酵生产丁二酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明主要通过在大肠杆菌中过量表达NAD+生物合成相关的基因，并在厌氧培养基中添加一定浓度的烟酸作为NAD+生物合成的前体物质，从而提高菌株在厌氧条件下的生长速率及丁二酸的合成速率。通过该方法，可以解决重组大肠杆菌专一性厌氧发酵过程中丁二酸生产速率慢的问题，同时为利用大肠杆菌厌氧生产酶制剂提高了一种手段。
一种制备重组大肠杆菌发酵生产丁二酸方法

[发明专利]一种酯酶在拆分(R,S)-5-己内酯中的应用-CN201910217706.6有效
发明人：郑建永;李露园;汪钊;章银军;孙杰 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2019-03-21 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： C12P41/00 文献下载
摘要：本发明酯酶基因可与表达载体连接构建得到含该基因的胞内表达重组质粒，再转化至大肠杆菌菌株中，获得重组大肠杆菌工程菌；该重组大肠杆菌经细胞破碎，分离纯化获得重组酯酶；该重组酯酶具有催化拆分(R,S)‑5‑己内酯的能力
一种拆分内酯中的应用

[发明专利]确定生物制品中大肠杆菌DNA含量的方法及试剂盒-CN201610309585.4有效
发明人：王学海;周昌茂;许勇;马铮;黄璐;马梵辛;肖强;刘哲 -专利权人：武汉光谷人福生物医药有限公司;湖北生物医药产业技术研究院有限公司;人福医药集团股份公司
申请日： 2016-05-11 - 公布日： 2020-07-21 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提出了一种确定生物制品中大肠杆菌DNA含量的方法，该方法包括：利用大肠杆菌特异性引物组，对所述生物制品进行实时荧光定量PCR检测，以便确定所述生物制品中大肠杆菌DNA含量。利用本发明实施例的方法，能够对生物制品中大肠杆菌DNA的含量进行定量分析，且操作简便、耗时短、灵敏度高，对生物制品中大肠杆菌DNA含量的最低检测限可达2.0fg/微升。可以为以大肠杆菌细胞为宿主的生物技术药物的生产提供可靠的质控证据，为重组生物技术药物的研发和安全生产提供重要支持。
确定生物制品大肠杆菌 dna 含量方法试剂盒

[发明专利]能生产活性重组藻胆蛋白的微生物及其制备方法-CN96120236.X无效
发明人：秦松;李新萍;姜鹏;王希华;曾呈奎 -专利权人：中国科学院海洋研究所
申请日： 1996-10-23 - 公布日： 2000-10-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种新的大肠杆菌菌株Ｐ１及其制备方法，该菌株能利用Ｐｔａｃ启动子高效表达具有抑瘤活性的重组藻胆蛋白。该菌株是由蓝藻中克隆的藻胆蛋白基因与大肠杆菌的麦芽糖结合蛋白（ＭＢＰ）基因构成的嵌合基因转化大肠杆菌后经筛选获得的。
生产活性重组蛋白微生物及其制备方法

[发明专利]重组蛋白A基因及其表达产物的制备-CN200810240553.9有效
发明人：宫照龙;何新舟;曹晖;许允立 -专利权人：本元正阳基因技术有限公司
申请日： 2008-12-24 - 公布日： 2010-06-30 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明是将蛋白A的B结构域基因单体根据大肠杆菌密码子的偏爱性进行优化，构建六串体插入热诱导型大肠杆菌载体pBV220，构建了含有该基因的大肠杆菌表达载体及其转化的大肠杆菌DH5α重组株和利用此菌株生产重组蛋白此菌株所产生的可溶性重组蛋白A达到细菌可溶性蛋白总量的80％以上，以后只经镍离子螯合层析和分子筛柱层析即可将重组蛋白A纯化到95％以上纯度，且该蛋白具有表达量高、成本低、易纯化等优点。用其制备的重组蛋白A亲和填料具有人IgG吸附载量高、proA脱落少等优点。本发明为获得质量高且价格便宜的抗体(药物)纯化介质重组蛋白A提供了一条切实可行的途径。
重组蛋白基因及其表达产物制备

[发明专利]用葡萄糖合成甘氨酸的大肠杆菌重组菌的构建及应用-CN201910841524.6有效
发明人：请求不公布姓名;请求不公布姓名;史鲁秋;汪昌国;薛虹宇;苏桂珍 -专利权人：南京盛德生物科技研究院有限公司;南京华狮新材料有限公司
申请日： 2019-09-06 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种用葡萄糖合成甘氨酸的大肠杆菌重组菌的构建及应用。本发明公开了一种大肠杆菌重组菌，首先通过构建谷氨酸乙醛酸转氨酶II基因cgaT的质粒pLB1k‑cgaT(Cqu)和苹果酸硫激酶、苹果酰辅酶A裂解酶和异柠檬酸裂解酶、异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶的重组质粒pSB1a‑mtk(Mca)‑mcl(Rsp)‑aceAK，再通过敲除抑制基因构建宿主菌GC05，再通过将质粒pLB1k‑cgaT(Cqu)导入GC05，形成重组菌GC06，最终将质粒pSB1a‑mtk(Mca)‑mcl(Rsp)‑aceAK导入GC07，得到大肠杆菌重组菌GC07。本发明还给出用大肠杆菌重组菌GC07将葡萄糖转化为甘氨酸的方法。本发明方法具有转化率高，成本低，反应简单，污染小等特点。
葡萄糖合成甘氨酸大肠杆菌重组构建应用

[发明专利]针对鸭疫里默氏杆菌感染引起的通用型亚单位疫苗-CN201910756269.5在审
发明人：管庆丰;杨慧;张海文;刘又铭;吴科榜 -专利权人：管庆丰
申请日： 2019-08-20 - 公布日： 2021-02-26 - 主分类号： A61K39/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白BamD的制备方法及其应用。培养大肠杆菌菌株并提取其DNA，设计大肠杆菌外膜蛋白表面抗原区域(21～274aa)基因序列的引物对，以鸭疫里默氏杆菌基因组DNA为模板进行PCR扩增。PCR产物和载体pET‑28a(+)连接并转化E.coli BL21感受态细胞中，采取IPTG诱导的方法，诱导大肠杆菌外膜蛋白rBamD表达。经过纯化最终得到重组的大肠杆菌外膜蛋白rBamD。该重组外膜蛋白具有一定的免疫原性及抗原性，能够有效抵抗鸭疫里默氏杆菌病的感染，以及鸭疫里默氏杆菌所引起的疾病。
针对鸭疫里默氏杆菌感染引起通用型单位疫苗