本发明公开了一种可降解菊粉果聚糖的外切菊粉酶Inu‑2及其应用。外切菊粉酶Inu‑2，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码本发明所述的外切菊粉酶Inu‑2的基因的CDS序列如SEQ ID NO.1所示。将Inu‑2基因转化至毕赤酵母中，经过甲醇诱导表达出重组菊粉酶Inu‑2。Inu‑2的酶活性在培养36小时后可达6.15U/mL。纯化的重组菊粉酶Inu‑2能水解利云型果聚糖和菊粉。在pH为6，45℃的条件下水解菊粉的能力最高，纯化的重组菊粉酶Inu‑2经优化酶活可达到46.3U/mg，可用于果糖的工业化生产。
本发明涉及一种外切菊粉酶的真核表达方法。其主要步骤是：首先将马克斯克鲁维酵母的外切菊粉酶的核苷酸序列(如SEQ ID No：1所示)通过限制性内切酶位点与毕赤酵母表达质粒pPICZαA连接获得重组表达载体，然后将重组表达载体导入毕赤巴斯德酵母宿主菌X-33或SMD1168中经诱导发酵表达目的蛋白(马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶)。本发明为开发具有工业应用价值的外切菊粉酶奠定了基础。
本发明公开了一种菊粉酶突变体MutY119H及其制备方法，该菊粉酶突变体MutY119H的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该突变体MutY119H的氨基酸序列是将野生外切菊粉酶InuAMN8的第与野生酶InuAMN8相比，本发明的突变酶MutY119H的低温活性提高，热稳定性降低，有利于酶的安全性使用和应用于低温环境要求下的生物技术领域。本发明的低温外切菊粉酶突变体MutY119H可应用于食品、酿酒和洗涤等行业。
本发明公开了一种热盐性改变的菊粉酶突变体MutY119T及其应用，该菊粉酶突变体MutY119T的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该突变体MutY119T的氨基酸序列是将野生外切菊粉酶InuAMN8与野生酶InuAMN8相比，本发明的突变酶MutY119T的低温活性提高，热稳定性降低，在氯化钠中的活性和稳定性降低，有利于酶的安全性使用和应用于低温环境要求下的生物技术领域。本发明的低温外切菊粉酶突变体MutY119T可应用于食品、酿酒和洗涤等行业。
本发明公开了一种热敏感的菊粉酶突变体MutY119N及其应用，该热敏感的菊粉酶突变体MutY119N的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该突变体MutY119N的氨基酸序列是将野生外切菊粉酶InuAMN8与野生酶InuAMN8相比，本发明的突变酶MutY119N的低温活性提高，热稳定性降低，有利于酶的安全性使用和应用于低温环境要求下的生物技术领域。本发明的低温外切菊粉酶突变体MutY119N可应用于食品、酿酒和洗涤等行业。
