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[发明专利]利用原生质体不对称融合技术获得葡萄杂种植株的方法-CN201610190362.0有效
发明人：吴月燕;饶慧云;钱萍仙;刘蓉;卢丹 -专利权人：浙江万里学院
申请日： 2016-03-30 - 公布日： 2019-01-15 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明提供一种利用原生质体不对称融合技术获得葡萄杂种植株的方法，包括以下步骤：取新鲜的胚性愈伤组织加酶液酶解；原生质体分别进行IOA钝化和UV钝化，得受体原生质体和供体原生质体按1︰1混合，依次加入PEG该方法以葡萄胚性愈伤组织为材料，利用原生质体不对称融合技术成功获得获得葡萄杂种植株，为培育葡萄新品种、增强葡萄的抗性、提高葡萄品质奠定了基础。
利用原生质体不对称融合技术获得葡萄杂种植株方法

[发明专利]一种农杆菌介导的葡萄座腔菌基因转化方法-CN201410172134.1有效
发明人：王洪凯;林福呈 -专利权人：浙江大学
申请日： 2014-04-25 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种农杆菌介导的葡萄座腔菌基因转化方法，包括制备葡萄座腔菌的原生质体，并对原生质体进行恢复培养；将含有目的基因的质粒载体转化到农杆菌中；将农杆菌与原生质体混合，于诱导平板上共培养后转移到筛选平板上培养本发明以原生质体为转化材料，利用农杆菌介导将目的基因转入葡萄座腔菌内，并整合到基因组中。并且原生质体在共培养前，需要进行恢复培养，当恢复培养时间为2～6h时，每管转化材料可获得20～30个潜在转化子，当恢复培养时间超过6h或低于2h，转化效率迅速下降，只能获得少数潜在转化子甚至难以得到潜在转化子
一种杆菌葡萄座腔菌基因转化方法

[发明专利]鉴别花脸香蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-1×8b-CN201310187961.3有效
发明人：许峰;李登进;刘宇;赵爽;王守现;王鹏;王兰青;耿小丽 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2013-05-20 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了鉴别花脸香蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-1×8b。该方法包括：分别以待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的PCR引物对进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，如果所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的PCR产物均含有或均不含有400bp-500bp的DNA片段，所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的交配型相同；如果其中的一株含有400bp-500bp的DNA片段，另一株不含有400bp-500bp的DNA片段，所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的交配型不同。
鉴别花脸原生质体单核交配方法及其专用引物 sr

[发明专利]鉴别花脸香蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-2×8-CN201310187918.7有效
发明人：许峰;刘宇;赵爽;王守现;李登进;王鹏;耿小丽;王兰青 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2013-05-20 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了鉴别或辅助鉴别花脸香蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-2×8。该方法包括分别以待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的PCR引物对进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，如果所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的PCR产物均含有或均不含有300bp-500bp的DNA片段，所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的交配型相同；如果其中的一株含有300bp-500bp的DNA片段，另一株不含有300bp-500bp的DNA片段，所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的交配型不同。
鉴别花脸原生质体单核交配方法及其专用引物 sr

[发明专利]鉴别花脸香蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-5×1-CN201310187613.6有效
发明人：许峰;刘宇;王守现;赵爽;王鹏;李登进;耿小丽;王兰青 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2013-05-20 - 公布日： 2013-08-07 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了鉴别或辅助鉴别花脸香蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-5×1。该方法包括分别以待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的PCR引物对进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，如果所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的PCR产物均含有或均不含有1000bp-1500bp的DNA片段，所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的交配型相同；如果其中的一株含有1000bp-1500bp的DNA片段，另一株不含有1000bp-1500bp的DNA片段，所述待鉴别的两株花脸香蘑原生质体单核体的交配型不同。
鉴别花脸原生质体单核交配方法及其专用引物 sr

[发明专利]原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝新种质的方法-CN201110074018.2有效
发明人：王神云;刘凡;王红;宗梅;李建斌 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2011-03-28 - 公布日： 2011-09-14 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过原生质体不对称融合技术创制抗霜霉病结球甘蓝新种质的途径，解决目前生产上基本没有对十字花科霜霉菌高抗甚至免疫的结球甘蓝品种，以及克服远源杂交不亲和和基因工程技术难度大、投资高等问题。一种原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝新种质的方法，其特征在于携带抗霜霉病基因的抱子甘蓝为供体，供体的原生质体经过UV射线处理；对霜霉病敏感且具有其它优良经济和农艺性状的结球甘蓝为受体，通过原生质体不对称融合途径创制抗霜霉病结球甘蓝新种质，本发明将抱子甘蓝抗霜霉病基因转入结球甘蓝，建立了利用原生质体融合；技术进行快速抗病新种质的选育体系，建立了现代甘蓝种质资源创新及抗病育种高效技术平台。
原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝种质方法

[发明专利]目的基因转化甜樱桃的方法及其在甜樱桃原生质体瞬时转化中的应用-CN201610330575.9有效
发明人：李天红;姚立萍;郭萧;赵迪;王彦涛 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2016-05-18 - 公布日： 2019-09-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了目的基因转化甜樱桃的方法及其在甜樱桃原生质体瞬时转化中的应用。本发明公开的甜樱桃转化方法包括：将甜樱桃果肉愈伤组织进行悬浮继代培养，得到悬浮细胞；将悬浮细胞用CPW13M进行处理，得到CPW13M处理的悬浮细胞，CPW13M为向细胞‑原生质体清洗液中加入甘露醇得到的甘露醇质量百分比浓度为11％‑15％的溶液；用纤维素酶和果胶酶酶解CPW13M处理的悬浮细胞得到甜樱桃原生质体；以甜樱桃原生质体为受体进行甜樱桃转化。实验证明，本发明的甜樱桃转化方法可以将目的基因在甜樱桃原生质体中进行瞬时表达，可以用来进行目的基因的功能验证及蛋白质和细胞器的定位，还可用来检测蛋白质互作及细胞代谢。
目的基因转化樱桃方法及其原生质体瞬时中的应用

[发明专利]一种蜡梅原生质体的制备方法-CN202110773434.5有效
发明人：赵凯歌;李雅迪;杨楠;赵荣;张倩;向林;陈龙清 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-07-08 - 公布日： 2022-10-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种蜡梅原生质体的制备方法，该方法包含：在黑暗条件下培养蜡梅的花药，诱导产生愈伤组织；将愈伤组织置于酶解溶液中，在振荡培养箱中黑暗培养，得到含原生质体的酶解液；其中，酶解溶液包含：纤维素酶和离析酶；在酶解液中加入适量W5溶液稀释，用细胞过滤器过滤；其中，W5溶液为氯化钠、氯化钙、氯化钾、2‑(N‑吗啉基)乙磺酸和水的混合液；将所得滤液离心，弃上清液，以获得含蜡梅原生质体的溶液。本发明的方法以蜡梅愈伤组织为材料制备原生质体，使用纤维素酶和离析酶酶解液组合，不受取材时间、数量的影响，酶解可得到平均1.11×106个/g的蜡梅原生质体产量，
一种原生质体制备方法

[发明专利]一种利用单核原生质体技术选育金针菇优良品种的方法-CN201810878454.7有效
发明人：王波 -专利权人：四川省农业科学院土壤肥料研究所
申请日： 2018-08-03 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： A01G18/40 文献下载
摘要：本申请涉及金针菇原生质体分离、单核原生质体鉴定、栽培出菇、分离培养和优良品种筛选等方法，利用该方法获得的品种遗传稳定，在遗传和育种上具有重要意义。
一种利用单核原生质体技术选育金针菇优良品种方法

[发明专利]一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法-CN202110530249.3有效
发明人：李辉;尹涛;杨雪珊 -专利权人：深圳大学
申请日： 2021-05-14 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12N1/12 文献下载
摘要：一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法，包括如下步骤:取待提取衣藻细胞消化细胞壁，得到悬浮液1；将悬浮液1中原生质体富集；将原生质体破碎后分离叶绿体。实验证明，本发明方法操作简单，叶绿体RNA中胞质RNA污染少，纯度高。
一种叶绿体以及 rna 提取方法

[发明专利]一种利用单细胞测序检测微量真菌的方法及试剂盒-CN201610535044.3有效
发明人：杨英;王升启;周喆;王澎;李珍;李宗玮 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
申请日： 2016-07-08 - 公布日： 2018-12-04 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明方法包括微量真菌细胞的获取、真菌细胞壁破壁提取真菌原生质、微量真菌原生质gDNA的提取和扩增、微量gDNA建库、基因组测序、生物信息学分析比对、判定所检测真菌的种类等步骤。
一种利用单细胞检测微量真菌方法试剂盒

[发明专利]一种以悬浮细胞原生质体为受体的杂交鹅掌楸高效的瞬间基因表达方法-CN201610954180.6在审
发明人：陈金慧;霍爱玲;施季森;陈桢雨;杨立明;成铁龙 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2016-11-03 - 公布日： 2017-03-15 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种以悬浮细胞原生质体为受体的杂交鹅掌楸高效的瞬间基因表达方法，包括杂交鹅掌楸悬浮系细胞原生质体的制备、质粒的准备、转化和观察。本发明以杂交鹅掌楸悬浮系细胞的原生质体做为遗传转化的受体系统，通过PEI介导的方法，以绿色荧光蛋白GFP基因作为报告基因，通过荧光显微镜检测到GFP基因高效的瞬间表达。本发明采用杂交鹅掌楸悬浮系细胞作为原生质体的来源，材料丰富且状态一致，背景信号弱，取材方便，建立的瞬间表达体系可为鹅掌楸及木兰科植物基因功能的研究提供一个快速方便的操作平台。
一种悬浮细胞原生质体受体杂交鹅掌高效瞬间基因表达方法

[发明专利]PEG介导芦笋茎枯病菌原生质体的遗传转化方法-CN201610322289.8在审
发明人：张岳平;陈光宇;瞿华香;赵萍;周劲松;尹玉玲 -专利权人：江西省农业科学院蔬菜花卉研究所
申请日： 2016-05-16 - 公布日： 2016-08-10 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明提供PEG介导芦笋茎枯病菌原生质体的遗传转化方法，包括芦笋茎枯病菌原生质体的制备、原生质体的遗传转化以及遗传转化子的筛选等步骤。本发明成功实现了PEG介导芦笋茎枯病菌原生质体的遗传转化，首次构建了一套针对该病原菌的高效遗传转化体系，获得大量能够多代稳定遗传的遗传转化子。
peg 芦笋病菌原生质体遗传转化方法

[发明专利]一种星油藤叶片细胞来源的原生质体的制备方法与质粒转化方法-CN202310116234.1在审
发明人：阳天泉;代欢;李飞;徐伟;李红梅;马俊超 -专利权人：中国科学院昆明植物研究所
申请日： 2023-02-15 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种星油藤叶片细胞来源的原生质体的制备方法与质粒转化方法。本发明通过优化星油藤叶片酶裂解时间，裂解温度和试剂使用浓度等条件，获得了高效的星油藤叶片原生质体分离方法。在此基础上，摸索了星油藤原生质体瞬时转化的方法，成功将带有GFP(绿色荧光蛋白)的外源质粒转化到星油藤叶片原生质体。该方法可以进一步用于基因功能分析。
一种星油藤叶片细胞来源原生质体制备方法质粒转化

[发明专利]一种马尾松原生质体制备方法-CN201910014852.9有效
发明人：姚瑞玲;王胤 -专利权人：广西壮族自治区林业科学研究院
申请日： 2019-01-08 - 公布日： 2022-02-22 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种马尾松原生质体制备方法，选用组培继代培养良好的马尾松悬浮胚性细胞为材料，经过离心沉降进行细胞分离，以纤维素酶、果胶酶、离析酶为分解酶进行细胞酶解，再经过清洗、纯化过程，获得了产量高、活力强的马尾松纯净原生质体本发明操作方法简单，并提供了一套完整的马尾松原生质体制备的方法，为今后开展马尾松原生质体培养、细胞融合、细胞膜结构功能分析和转基因技术方面的研究提供了有力的保障，具有较好的经济效益和社会效益。
一种马尾松原生质体制备方法