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[发明专利]一种制备别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法-CN200710029673.X有效
发明人：夏坤;佟顺刚 -专利权人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司
申请日： 2007-08-09 - 公布日： 2008-03-19 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法，通过应用藻胆蛋白beta裂合酶催化藻蓝胆素与别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备别藻蓝蛋白类荧光蛋白质；本发明的方法应用生物过程生产别藻蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法；别藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域，特别是应用为生物和医学分子检测领域的荧光探针。
一种制备别藻蓝蛋白荧光蛋白质方法

[发明专利]结合藻红胆素的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法-CN200810025689.8有效
发明人：夏坤;佟顺刚 -专利权人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司
申请日： 2008-01-08 - 公布日： 2009-07-15 - 主分类号： C12N15/60 文献下载
摘要：本发明公开了一种结合藻红胆素的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，是通过应用藻胆蛋白beta裂合酶催化藻红胆素(PEB)与别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备结合PEB的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质；本发明的方法应用生物过程生产别藻蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法；别藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域，特别是应用为生物和医学分子检测领域的荧光探针。
结合藻红胆素别藻蓝蛋白荧光蛋白质制备方法

[发明专利]同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法-CN200610171008.X无效
发明人：孟春晓;高政权 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2006-12-27 - 公布日： 2007-07-25 - 主分类号： C07K1/16 文献下载
摘要：本发明提供一种同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，其特征在于采用如下步骤：(1)制备藻胆蛋白粗提物，(2)羟基磷灰石装柱及平衡层析柱，(3)分别洗脱藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，(4)洗脱液的浓缩、脱盐及冷冻干燥，最终获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。本发明以人工养殖的钝顶螺旋藻纯藻粉为原料，采用羟基磷灰石柱层析法一次性分离了藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白两种蛋白，作为生产原料的螺旋藻藻粉则可以直接从市场上批量购买，价格低廉且纯度高，简化了从鲜活藻体中制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的繁琐步骤，用作柱料的羟基磷灰石可以自制，简单易行，且降低了生产成本，是目前较为理想的同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法。
同时制备蛋白别藻蓝方法

[发明专利]链霉亲和素标记的结合藻红胆素的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法-CN200810025746.2有效
发明人：夏坤;佟顺刚 -专利权人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司
申请日： 2008-01-10 - 公布日： 2009-07-15 - 主分类号： C12N15/60 文献下载
摘要：本发明公开了一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，是通过应用藻胆蛋白beta裂合酶催化藻红胆素(PEB)与链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的结合PEB的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质；本发明的方法应用生物过程生产别藻蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法；别藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域，特别是应用为生物和医学分子检测领域的荧光探针
亲和标记结合藻红胆素别藻蓝蛋白荧光蛋白质方法

[发明专利]制备链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法-CN200710030556.5无效
发明人：夏坤;佟顺刚 -专利权人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司
申请日： 2007-09-27 - 公布日： 2009-04-01 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法，通过应用藻胆蛋白beta裂合酶催化藻蓝胆素与链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质；本发明的方法应用生物过程生产链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法；链霉亲和素标记的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于生物学和医药功能材料领域，特别是应用为生物学和医学检测领域的荧光探针
制备亲和标记别藻蓝蛋白荧光蛋白质方法

[发明专利]菊粉源重组别藻蓝蛋白的制备方法-CN201210349471.4有效
发明人：李莉莉;秦松;席海瑞;张锐;宋璐非;王绍宇;刘冰 -专利权人：中国科学院烟台海岸带研究所
申请日： 2012-09-19 - 公布日： 2014-03-26 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明属于微生物发酵法生产蛋白质的领域，具体涉及一种菊粉源重组别藻蓝蛋白的微生物制备方法。将菊粉作为原料经降解作为种子液，再将大肠杆菌P2在发酵培养基的作用下经摇床或发酵罐培养，最后经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，即得到菊粉源重组别藻蓝蛋白。本发明所得重组别藻蓝蛋白能应用于食品、保健与医药及功能材料等领域。菊粉源重组别藻蓝蛋白制备方法简单，为菊粉的生物利用找到一条低成本高产出的应用途径，与以葡萄糖为碳源相比，大大降低了发酵生产重组别藻蓝蛋白的原料成本。
菊粉组别蛋白制备方法

[发明专利]一种制备别藻蓝蛋白三聚体荧光蛋白的方法-CN200910255643.X无效
发明人：刘少芳;陈英杰;路延笃;陈华新;李富超;秦松 -专利权人：中国科学院海洋研究所
申请日： 2009-12-11 - 公布日： 2011-06-15 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明属于生物技术中荧光蛋白质材料领域，具体涉及一种制备别藻蓝蛋白三聚体荧光蛋白质的方法。首先将别藻蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白基因与藻胆素生物合成酶基因hol和pcyA克隆到一个表达载体中；其次将别藻蓝蛋白β亚基脱辅基蛋白基因与色基裂合酶基因cpcS和cpcU克隆到另一个载体上，将两个表达载体同时转化大肠杆菌，筛选出同时表达上述基因的工程菌，即为别藻蓝蛋白三聚体荧光蛋白。本发明不使用藻类为原料而是利用大肠杆菌生产重组光活性蛋白，大肠杆菌易于培养，生长快，可以大大缩短生产周期；与藻类相比，大肠杆菌细胞壁易于破碎，纯化过程可以节约能源，利用率高。
一种制备别藻蓝蛋白三聚体荧光方法

[发明专利]一种同时分离纯化试剂级的藻蓝蛋白与别藻蓝蛋白的方法-CN201611129493.4有效
发明人：汪家权;张发宇;余金卫;苏雨;张晓萌;匡武 -专利权人：合肥工业大学
申请日： 2016-12-09 - 公布日： 2019-10-18 - 主分类号： C07K14/795 文献下载
摘要：本发明提供一种同时分离纯化试剂级的藻蓝蛋白与别藻蓝蛋白的方法，先将蓝藻破壁并固液分离得到藻胆蛋白粗提液，再进行两步盐析，获得沉淀后用磷酸盐缓冲液溶解，并用磷酸盐缓冲液作为透析液将溶解后的溶液透析，以获得透析后的藻胆蛋白溶液，最后进行纤维素柱层析以及羟基磷灰石柱层析，以获得了试剂级的藻蓝蛋白和试剂级的别藻蓝蛋白。本发明以水华新鲜蓝藻为原料，通过采用盐析联合柱层析分离纯化试剂级藻蓝蛋白和试剂级别藻蓝蛋白，与传统层析法工艺相比，在兼顾蛋白质回收率的前提下，能同时提取纯化两种高纯度的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，提高了蓝藻细胞中高价值蛋白综合提取纯化的效率
一种同时分离纯化试剂蛋白别藻蓝方法

[发明专利]结合藻蓝胆素PCB的别藻蓝蛋白亚基类荧光蛋白及其应用-CN200810219674.5无效
发明人：夏坤;佟顺刚 -专利权人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司
申请日： 2008-12-04 - 公布日： 2010-06-30 - 主分类号： C07K14/405 文献下载
摘要：本发明涉及一种结合藻蓝胆素PCB的别藻蓝蛋白亚基类荧光蛋白及其与链霉亲和素形成的融合蛋白，其序列为序列1至序列10；并公开了融合链霉亲和素的荧光蛋白直接用于荧光免疫检测的应用；别藻蓝蛋白亚基保守的半胱氨酸残基可以通过硫醚键结合藻蓝胆素PCB，通过基因工程利用大肠杆菌制备得到荧光别藻蓝蛋白的亚基，这类蛋白的光谱性质由于带有His-tag标记，不仅便于提纯，还有助于改善其溶解性，与链霉亲和素形成融合蛋白，可以直接用于免疫荧光检测，有利于其在各个领域中的应用
结合藻蓝胆素 pcb 别藻蓝蛋白亚基类荧光及其应用

[发明专利]结合藻红胆素PEB的别藻蓝蛋白亚基类荧光蛋白及其应用-CN200810219667.5无效
发明人：夏坤;佟顺刚 -专利权人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司
申请日： 2008-12-04 - 公布日： 2010-06-30 - 主分类号： C07K14/405 文献下载
摘要：本发明涉及一种结合藻红胆素PEB的别藻蓝蛋白亚基类荧光蛋白及其与链霉亲和素形成的融合蛋白，其序列为序列1至序列10；并公开了融合链霉亲和素的荧光蛋白直接用于荧光免疫检测的方法；别藻蓝蛋白亚基保守的半胱氨酸残基可以通过硫醚键结合藻红胆素PEB，通过基因工程利用大肠杆菌制备得到荧光别藻蓝蛋白的亚基，这类蛋白的光谱性质由于带有His-tag标记，不仅便于提纯，还有助于改善其溶解性，与链霉亲和素形成融合蛋白，可以直接用于免疫荧光检测，有利于其在各个领域中的应用
结合藻红胆素 peb 别藻蓝蛋白亚基类荧光及其应用

[发明专利]一种利用长波长别藻蓝蛋白荧光检测抗氧化能力的方法-CN201711263137.6在审
发明人：吴继魁;宋人君;徐蓁禾;罗磊;张俊玲 -专利权人：上海海洋大学
申请日： 2017-12-04 - 公布日： 2018-02-27 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明属于食品快速检测领域，公开了一种利用长波长别藻蓝蛋白荧光检测抗氧化能力的方法。本方法选用别藻蓝蛋白作为荧光指示剂，与抗氧化剂竞争由AAPH释放出的自由基，从而导致别藻蓝蛋白自身的荧光衰退时间延后，以未含有抗氧化剂的衰退曲线为空白，计算两者AUC差值，建立标准曲线并进行实际样品的检测本发明的优点别藻蓝蛋白属于长波长荧光指示剂，其激发波长为653nm，发射波长为668nm，可以避开实际样品中自发荧光物质的干扰；具有高的pH稳定性；对内外猝灭不敏感。
一种利用波长别藻蓝蛋白荧光检测氧化能力方法

[发明专利]同时分离高纯度的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法与应用-CN201110268917.6有效
发明人：陈填烽;郑文杰;蒋洁;杨芳;黄家兴 -专利权人：暨南大学
申请日： 2011-09-13 - 公布日： 2012-01-25 - 主分类号： C07K14/405 文献下载
摘要：本发明公开一种同时分离高纯度的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法与应用。本发明将螺旋藻干粉反复冻融，超声破碎，离心，上清为藻胆蛋白粗提液；接着加入硫酸铵，饱和度为25～35％时取上清；再加入硫酸铵，饱和度为60～70％时取沉淀，透析沉淀，得到初步纯化的藻胆蛋白提取液，将其上样到羟基磷灰石柱子；收集含0.1～0.2M氯化钠的pH6.5～7.2、0.02～0.03M磷酸盐缓冲溶液和含0.1～0.2M氯化钠的pH6.5～7.2、0.1～0.12M磷酸盐缓冲溶液，前者为藻蓝蛋白，后者为别藻蓝蛋白。该制备方法能同时获得纯化因子达到4.5的藻蓝蛋白和3的别藻蓝蛋白及其含硒、碲类似物，并对其纯化规模进行放大，一次层析可获得克级的高纯度蛋白，大大降低纯化成本，能用于生产藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。
同时分离纯度蛋白别藻蓝方法应用

[发明专利]一种别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法-CN200810157782.4无效
发明人：张伟杰;关翔宇;秦松;陈华新;杨雨;刘少芳 -专利权人：中国科学院海洋研究所
申请日： 2008-10-17 - 公布日： 2009-05-27 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明属于生物技术中色素蛋白质材料领域，具体涉及一种新型荧光蛋白质的制备方法。具体为1)将别藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因或其同源基因和藻胆素生物合成酶基因(Hox1和pcyA)克隆于同一表达载体中，得到脱辅基蛋白和色素合成酶共同的表达质粒；2)将上述表达质粒转化宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌发酵生产别藻蓝蛋白类荧光蛋白质；发酵后，用常规蛋白质纯化技术，一步纯化得到相应的别藻蓝蛋白类荧光蛋白质。本发明利用生物过程生产，是一种环境友好的生产方法；该蛋白具有不同于天然蛋白的荧光特性，实现了生物技术对天然蛋白的改造。
种别蛋白荧光蛋白质制备方法

[发明专利]一种高荧光强度的重组藻胆蛋白串联体的制备方法-CN201510990559.8有效
发明人：陈华新;姜鹏;武静;李富超 -专利权人：中国科学院海洋研究所
申请日： 2015-12-25 - 公布日： 2021-01-26 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于生物技术中荧光蛋白质领域，具体的说是一种高荧光强度的重组藻胆蛋白串联体的制备方法。将链霉亲和素基因与别藻蓝蛋白α亚基基因，通过linker序列连接起来。在此基础上，再通过linker序列实现一个或多个别藻蓝蛋白α亚基基因的串联，形成融合基因。将该融合基因与藻胆蛋白裂合酶基因和藻红胆素生物合成酶基因在大肠杆菌中共表达，获得具有生物素结合能力的、荧光强度更高的重组别藻蓝蛋白串联体。在免疫荧光检测中，重组藻胆蛋白串联体得到比重组藻胆蛋白单体更强的荧光信号。本发明中制备的重组藻胆蛋白串联体，可作为生物学和生物医学领域中免疫荧光检测的荧光标记物。
一种荧光强度重组蛋白串联制备方法

[发明专利]一次柱层析制备高纯度藻胆蛋白的方法-CN200810134122.4无效
发明人：冯亚非;李先文;温燕梅;部音利 -专利权人：广东海洋大学
申请日： 2008-07-16 - 公布日： 2009-01-14 - 主分类号： C07K1/16 文献下载
摘要：本发明涉及从藻类中同时制备高纯度藻红蛋白、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法，属于生物工程提取分离技术。粗提物经一次羟基磷灰石柱层析，磷酸盐缓冲液梯度洗脱，冷冻干燥，得到高纯度的藻红蛋白、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。本发明前期采用有效的方法制备的藻胆蛋白粗提物，纯度达到药品级标准(A₆₂₀/A₂₈₀＞2.0)，从而简化了后续的纯化步骤，只需一次柱层析即可分别得到高纯度的藻红蛋白、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。本方法从鲜藻和干藻中提取高纯度藻胆蛋白，工艺流程简单，生产成本低，蛋白得率高，适合大规模生产。
一次层析制备纯度蛋白方法

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