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[发明专利]一种奶牛再克隆的方法-CN200710064767.0无效
发明人：张家新;王海;张向利;赵孟彬;张红霞;郭丽丽;安晶;王月;郭敏 -专利权人：北京锦绣大地农业股份有限公司
申请日： 2007-03-26 - 公布日： 2007-10-10 - 主分类号： C12N15/06 文献下载
摘要：本发明涉及“一种奶牛的再克隆方法”包括供体细胞和受体卵母细胞培养，核移植、融合与激活，重构胚的培养和重构胚移植，其特征在于：所述受体细胞的培养液中添加有：M199+10％FCS+10μg/ml FSH+Penicillium+0.05gStreptomycin+0.57mmol/ml Cysteine+1mmol/ml L－Glutamine+10ng/ml EGF(Epidermal GrowthFactor)；供体细胞的培养液中添加有
一种奶牛克隆方法

[发明专利]一种落叶松体细胞胚再生的方法-CN202010265138.X在审
发明人：盖颖;刘威锋;吴晓雪;蒋湘宁 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2020-04-07 - 公布日： 2020-06-16 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种落叶松体细胞胚再生方法，所述方法的步骤包括：采集落叶松未成熟种子合子胚为外植体，诱导出落叶松胚性愈伤组织；在新继代培养基上培养7～10天，选择生长良好的胚性愈伤组织，接于锥形瓶中液体培养基中悬浮条件下暗培养4～7天；然后将培养物转入半固体培养基，于摇床50～125rpm，20～25℃，悬浮条件下暗培养4～7天；最后将培养物接于固体培养基表面，20～25℃，暗培养23～30天，形成后期子叶胚。所述方法能大量诱导产生优质体细胞胚，减少畸形胚，诱导体胚形成时间短，且能达到更好的同步化效果并且具有高诱导效率。
一种落叶松体细胞再生方法

[发明专利]一种提高体细胞重编程效率的方法-CN200810119651.7有效
发明人：周琪;王柳;代相鹏;侯晓军;范勇;郝捷 -专利权人：中国科学院动物研究所
申请日： 2008-09-04 - 公布日： 2010-03-10 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明提供一种提高体细胞重编程效率的方法，一种提高克隆胚胎的体外发育率的方法，一种提高克隆胚胎的到期发育率的方法，一种提高体外核移植非人类胚胎干细胞建系效率的方法，一种用于胚胎移植的重构胚的体外处理方法，这些方法都包括采用间羧基肉桂酸二羟基酰胺处理重构胚。本发明还提供了间羧基肉桂酸二羟基酰胺在制备提高体细胞重编程效率的药物中的用途。
一种提高体细胞编程效率方法

[发明专利]一种猪体细胞核移植融合方法-CN201510395624.2在审
发明人：吴珍芳;周荣;石俊松;罗绿花 -专利权人：广东温氏食品集团股份有限公司
申请日： 2015-07-06 - 公布日： 2015-10-28 - 主分类号： C12N15/06 文献下载
摘要：本发明涉及克隆技术领域，具体公开了一种猪体细胞核移植融合方法。所述的融合方法，包含如下步骤：S1.将重构胚放入融合液中平衡，然后用融合液洗涤，再放入铺满融合液的融合槽中；S2.拨动重构胚，使供体细胞-受体卵细胞膜接触面与电极平行放置，同时使重构胚在融合槽中成曲线排列；S3.用细胞融合仪施加直流电脉冲诱导融合并同时激活，S4.接着用胚胎培养液洗涤，立即转入矿物油覆盖的胚胎培养液中或辅助激活液中，然后置于培养箱中培养，再在体视显微镜下判定融合情况。所述方法一次性可以操作融合15~20个重构胚，大幅度提升了融合效率。
种猪体细胞移植融合方法

[发明专利]荷花体细胞胚胎发生途径的再生用培养基及其应用-CN201711210241.9有效
发明人：方林川;李绍华 -专利权人：武汉市农业科学技术研究院林业果树科学研究所
申请日： 2016-06-21 - 公布日： 2019-08-06 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种荷花体细胞胚胎发生途径的再生用培养基及其应用。该培养基包括胚性愈伤诱导与增殖培养基和胚状体发生培养基，培养方法是将外植体放入胚性愈伤诱导与增殖培养基中培养，诱导出愈伤组织并进行增殖培养；将愈伤组织块转移到胚状体发生培养基中，发育形成胚状体；将产生的胚状体移入胚萌发培养基中进行萌发，发育形成子叶形胚；将萌发的子叶形胚移至含荷花成苗培养基中成苗培养，然后移栽至自然环境中。通过本发明的培养基培养，一个外植体能分化出一块胚性愈伤团，从中能高效分化1000个以上的体细胞胚并最终萌发，既能促进荷花的转基因发展，又可以为荷花的栽培应用提供大量的种苗。
荷花体细胞胚胎发生途径再生培养基及其应用

[发明专利]一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法-CN201310354562.1有效
发明人：曾建国;李炎林;柳亦松;芦强;宋锡帅 -专利权人：湖南农业大学;湖南省中药提取工程研究中心有限公司
申请日： 2013-08-15 - 公布日： 2013-11-27 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法，属于植物组织培养技术领域。方法包括：(1)培养基的配制；(2)博落回体细胞胚胎发生；（3）体细胞胚胎萌发与成苗；(4)再生苗的移栽与培养等。本发明以博落回的花丝作为胚状体诱导外植体所建立的组培方法，能够快速、高效、大规模的生产高质量的博落回种苗。
一种博落回体细胞胚胎发生植株再生方法

[发明专利]一种利用微小核糖核酸提高牛克隆效率的方法-CN201610537461.1有效
发明人：张涌;张景程;屈鹏翔;王勇胜 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2016-07-08 - 公布日： 2018-12-04 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用微小核糖核酸提高牛克隆效率的方法，在体细胞核移植的电融合液中加入bta‑miR‑125b mimic，可以有效地导入到胚胎中，在避免产生转染的二次损伤的同时，还能有效地减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量。
一种利用微小核糖核酸提高克隆效率方法

[发明专利]樱桃谷鸭胚上皮细胞系及其建立方法-CN201310334797.4有效
发明人：王文秀;沈志强 -专利权人：山东省滨州畜牧兽医研究院
申请日： 2013-08-02 - 公布日： 2014-04-16 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明“樱桃谷鸭胚上皮细胞系及其建立方法”属于细胞生物学领域。建立方法是无菌取9-12日龄的鸭胚组织，剪成组织块后，将其向下贴于培养孔的底部，然后加入培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养。本发明基于该方法得出了一株高活率、高纯度的樱桃谷鸭胚上皮细胞系株并进行了生物保藏，该细胞系与原代细胞相比，细胞形态以生理特性有明显差异，可以连续稳定传代，营养要求低，生长周期短，适合大规模培养为基因工程、细胞工程、免疫学和分子生物学等生命科学研究提供大量高品质的细胞材料；也可作为家禽体细胞克隆育种的供体细胞；还可作为鸭病毒分离和疫苗生产的主要原材料。
樱桃谷鸭胚上皮细胞系及其建立方法

[发明专利]一种固定植物杂种优势的方法-CN201910307985.5有效
发明人：曹孟良;夏玉梅;詹祎捷;唐宁;卜小兰;余木兰;袁隆平 -专利权人：湖南杂交水稻研究中心
申请日： 2019-04-17 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明将4个紧密连锁的基因表达盒转入杂交植物，包括：A、卵细胞或胚特异表达启动子驱动的致死基因表达盒E1；B、珠被等体细胞特异表达启动子驱动的胚发生基因表达盒E2；C、花粉特异表达启动子驱动的花粉失活基因表达盒杂合转基因植物在自交结实过程中珠被体细胞形成胚，未携带转基因的精子与中央细胞结合形成胚乳，进而发育成种子；未携带转基因的卵细胞和精子正常受精而结实；而携带转基因的卵细胞败育，不能参与受精。
一种固定植物杂种优势方法

[发明专利]一种荷花未成熟子叶体细胞胚胎发生途径的再生方法-CN201610455479.7在审
发明人：方林川;刘玉平;周媛;李绍华;辛海平 -专利权人：武汉市农业科学院
申请日： 2016-06-21 - 公布日： 2016-11-16 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种荷花未成熟子叶体细胞胚胎发生途径的再生方法，其包括：(1)选取荷花受精后合子胚中的未成熟子叶作为组织培养的外植体，对外植体进行消毒及清洁处理；(2)将外植体放入胚性愈伤诱导与增殖培养基中培养，诱导出愈伤组织并进行增殖培养；(3)将愈伤组织块转移到胚状体发生培养基中，发育形成胚状体；(4)将产生的胚状体移入胚萌发培养基中进行萌发，发育形成子叶形胚；(5)将萌发的子叶形胚移至含荷花成苗培养基中成苗培养本发明的一个外植体能分化出一块胚性愈伤团，从中能高效分化1000个以上的体细胞胚并最终萌发，既能促进荷花的转基因发展，又可以为荷花的栽培应用提供大量的种苗。
一种荷花未成熟子叶体细胞胚胎发生途径再生方法

[发明专利]一种促进油松体细胞胚胎发育成熟的培养方法-CN201910776447.0有效
发明人：孔立生;张金凤;赵健;李亦轩;崔莹;范英明 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2019-08-22 - 公布日： 2021-05-11 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进油松体细胞胚胎(体胚)发育成熟的方法，包括对油松胚性组织进行液体前处理培养，其中所述胚性组织前处理培养基中含有多胺合成抑制剂类调节剂。本发明方法在液体前处理培养基和胚胎成熟培养基里添加多胺合成抑制剂类调节剂，以达到抑制胚性组织在胚胎成熟过程中的过量增殖，促进体胚的发育和成熟，提高成熟体细胞胚胎的质量和数量的目的。使用本发明的方法能从油松胚性较弱，增殖过量的基因型材料中获得更多的成熟体胚和体胚苗，有利于油松体胚苗基因型的多元化，从而能克服无性系林业基因型的局限性，规模化、工厂化生产多基因型油松体胚苗。
一种促进油松体细胞胚胎发育成熟培养方法

[发明专利]一种珙桐体细胞胚胎发生再生植株培养方法-CN202310212863.4在审
发明人：令狐高曼;康永祥;段榕怡;戴钊;董嘉明;王安旗;刘睿 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2023-03-08 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明提供一种珙桐体细胞胚胎发生再生植株培养方法，包括以下内容：（1）外植体选择与消毒：选取珙桐最适时期的未成熟合子胚为外植体，使用消毒液对外植体进行消毒处理，完成后作为胚性愈伤组织诱导用的材料；（2）胚性愈伤组织诱导培养：将（1）中处理后的外植体置于胚性愈伤组织诱导培养基中培养，得到胚性愈伤组织；（3）体胚发育诱导培养：将（2）中处理后的胚性愈伤组织置于体胚发育诱导培养基中培养，得到成熟体胚；（4）体胚萌发及转化植株培养：将（3）中培养得到的成熟体胚置于萌发培养基中进行培养，培养完成后在再置于转化植株培养基中培养，培养完成后即可得到珙桐再生植株。本发明所述体细胞胚胎发生再生植株方法具有胚性愈伤组织诱导率较高，体胚诱导效果好，诱导的体胚能正常萌发成完整植株且生长健壮的特点。
一种珙桐体细胞胚胎发生再生植株培养方法

[发明专利]一种厚朴胚性愈伤组织玻璃化超低温保存方法-CN202010333403.3有效
发明人：林亮;贾艳霞;马俊超;郁步竹;徐倩;高彦粉;李唯奇 -专利权人：中国科学院昆明植物研究所
申请日： 2020-04-24 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： A01N3/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种厚朴胚性愈伤组织玻璃化超低温保存方法，涉及厚朴种质保存技术领域。本发明所述方法基于再生的厚朴胚性愈伤组织增殖速率快，能够长期进行增殖和分化，且分化为体细胞胚的效率较高，转化为植株的效率高的特点，利用胚性愈伤组织进行加载处理，植物玻璃化处理从而完成超低温保存。本发明所述方法具有永久保存，不受自然环境变化的影响，保存效率高，方便管理；且再生后可以快速进行增殖和分化，分化的体细胞胚直接发育成植株，且转化率高，无需进行生根培养。
一种厚朴胚性愈伤组织玻璃化超低温保存方法

[发明专利]通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法-CN201110261686.6有效
发明人：何洪彬;王洪梅;武建明;刘晓;陈莉莉;高运东;仲跻峰 -专利权人：山东省农业科学院奶牛研究中心
申请日： 2011-09-06 - 公布日： 2012-01-18 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过敲除口蹄疫病毒受体整合素β6亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法，是将线性化的携带有报告基因的突变的整合素β6亚基基因的打靶载体转染牛体细胞，通过同源重组获得替换整合素β6亚基基因的核供体细胞，将核供体细胞核导入牛的去核卵母细胞中得到重构胚，再将重构胚移入代孕牛子宫中，得到的子代即为整合素β6亚基基因被敲除的杂合子转基因牛。杂合子转基因牛经二次打靶和体细胞克隆获得纯合子转基因牛。用本方法获得的转基因牛低表达或不表达口蹄疫病毒受体整合素β6亚基，使FMDV感染率明显下降，其具备了抗FMD的能力。
通过口蹄疫病毒受体整合基因获得口蹄疫转基因方法

[发明专利]通过敲除口蹄疫病毒受体整合素αv亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法-CN201110314862.8有效
发明人：何洪彬;武建明;王洪梅;刘晓;王晓晶;高运东;仲跻峰 -专利权人：山东省农业科学院奶牛研究中心
申请日： 2011-10-17 - 公布日： 2012-02-15 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过敲除口蹄疫病毒受体整合素αv亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法，是将线性化的携带有报告基因的突变的整合素αv亚基基因的打靶载体转染牛体细胞，通过同源重组获得替换整合素αv亚基基因的核供体细胞，将核供体细胞核导入牛的去核卵母细胞中得到重构胚，再将重构胚移入代孕牛子宫中，得到的子代即为整合素αv亚基基因被敲除的杂合子转基因牛。杂合子转基因牛经二次打靶和体细胞克隆获得纯合子转基因牛。用本方法获得的转基因牛低表达或不表达口蹄疫病毒受体整合素αv亚基基因，使FMDV感染率明显下降，其具备了抗FMD的能力。
通过口蹄疫病毒受体整合基因获得口蹄疫转基因方法