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[发明专利]一种电转后PBMC的培养方法-CN201810129577.0在审
发明人：金华君;徐飞;刘韬;李林芳;钱其军 -专利权人：上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2019-08-16 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供一种电转后PBMC的培养方法，该方法包括电转人外周血单个核细胞后，先使用含人外周血单个核细胞培养液的上清液的复苏液培养该电转后的人外周血单个核细胞2‑10小时的步骤。本发明还包括使用所述复苏液复苏冻存的人外周血单个核细胞以及培养人外周血单个核细胞的方法。本发明也包括所述复苏液。本发明的复苏液能促进电转后外周血单个核细胞的生长，进而提高其活力；采用本发明的复苏液对冷冻人外周血单个核细胞进行复苏和电转后孵育，能够有效减少冷冻复苏细胞在电转后的死亡，促进细胞增殖。
人外周血单个核细胞电转复苏液复苏冷冻培养液外周血单个核细胞促进细胞增殖有效减少上清液冻存孵育细胞生长死亡

[发明专利]将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂及其所用组合物-CN201811502978.2在审
发明人：曹延粉;黄庆雷;赵伟;王培培;占天焱;沈丽;邓钺 -专利权人：北京弘润天源基因生物技术有限公司
申请日： 2018-12-10 - 公布日： 2019-04-23 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂及其所用组合物。将外周血单个核细胞诱导为CIK的组合物由抗CD3抗体、抗CD28抗体、IL‑2、IL‑15和IL‑12组成。将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂包括该组合物和冻存外周血单个核细胞复苏液。将人外周血单个核细胞诱导为CIK的组合物与对照组合物相比，从不同健康志愿者获得的CIK细胞中CD3+CD56+细胞的含量提高了72‑76％，CD3+CD8+细胞的含量提高了20‑21％。该冻存外周血单个核细胞复苏液与常规复苏液相比，可显著提高冻存人外周血单个核细胞的细胞活率，使从冻存人PBMC得到的CIK中的CD3+CD56+细胞含量提高47％。
外周血单个核细胞诱导冻存复苏液细胞人外周血单个核细胞对照组合物抗CD28抗体抗CD3抗体人PBMC 健康

[发明专利]一种人外周血免疫细胞库的构建方法-CN201210269737.4有效
发明人：王肇光;薛书奎;蔡平平;田甜;邢晓;李财新;陈莉 -专利权人：济南赛尔生物科技有限公司
申请日： 2012-07-30 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种人外周血免疫细胞库的构建方法，步骤包括：采集人外周血，分离自体血浆，分离外周血单个核细胞，由外周血单个核细胞分离单核细胞并冻存，由外周血单个核细胞分离T淋巴细胞并冻存，由外周血单个核细胞分离B淋巴细胞并冻存，由外周血单个核细胞分离NK细胞并冻存，编码入库。本发明把健康或青年人的免疫细胞分离出，并分别单独冻存，关联编号保存入库，使保存的人免疫细胞具有活性高、纯度高、使用方便的特点，并且用人自体血浆可以代替胎牛血清使用，避免了引入外源蛋白。
一种人外周血免疫细胞构建方法

[发明专利]冻存人外周血单个核细胞的复苏液及方法-CN201810129440.5有效
发明人：金华君;徐飞;刘韬;李林芳;钱其军 -专利权人：上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及冻存人外周血单个核细胞的复苏液及方法，所述复苏液含有人外周血单个核细胞培养液的上清液和任选的人外周血单个核细胞的培养基。本发明的复苏方法包括在冻存的人外周血单个核细胞解冻后立即用所述复苏液制备细胞悬液并进行培养的步骤。相比采用现有方法复苏后的细胞，其活力显著提高，细胞死亡数量明显减少。
冻存人外周血单个细胞复苏方法

[发明专利]一种人外周血NK细胞库的构建方法-CN202010856398.4在审
发明人：王晓宇;李崴;郭康合;林冠妃;蔡开婷;王岱桑;陈多峰 -专利权人：海南优尼科尔生物科技有限公司
申请日： 2020-08-24 - 公布日： 2020-12-04 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种人外周血NK细胞库的构建方法，步骤依次包括：采集人外周血，分离自体血浆，分离外周血单个核细胞并部分冻存得到NK细胞种子库，扩增NK细胞后并冻存，由外周血单个核细胞培养扩增NK后冻存或者由外周血单个核细胞分离纯化NK细胞并扩增培养后冻存，NK细胞检测，编码入库并上传细胞信息档案；本发明优点在于：构建人成体外周血NK细胞库，将人健康的或者年轻的NK细胞通过一定方法建库，是充分保存和利用现有NK细胞资源的有效方法，它为存储自体或者异体在需要采用免疫细胞治疗技术时提供有力的支持，具有重要的意义。
一种人外周血 nk 细胞构建方法

[发明专利]一种大鼠神经支架的构建方法-CN202011617426.3在审
发明人：孙广峰;李璐希;陶科融;游兴;张驰;刘野 -专利权人：遵义医科大学第二附属医院
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： A61L27/38 文献下载
摘要：本发明属于神经支架构建技术领域，公开了一种大鼠神经支架的构建方法，包括制备外周血单个核细胞PBMCs溶液，制备脱细胞异体神经，构建脱细胞异体神经复合外周血单个核细胞的神经支架。本发明中的外周血单个核细胞的提取方便快捷，创伤小，脱细胞异体神经复合外周血单个核细胞的大鼠神经支架的构建技术不复杂，利于技术推广应用；自体外周血单个核细胞用于自体神经缺损的修复，无免疫原性、致瘤性、不涉及伦理等问题；用于自体神经缺损的修复，可以避免自体神经移植术供区感觉运动功能障碍，减少了副损伤；为构建人脱细胞异体神经复合自体外周血单个核细胞神经支架用于重建修复周围神经缺损提供了强有力的理论依据。
一种大鼠神经支架构建方法

[发明专利]一种细胞冻存液及其制备方法和应用-CN201710072813.5在审
发明人：陈晨;林科佳;马冬磊;罗晓玲;魏志璋;王宇环;魏宗科 -专利权人：深圳市合一康生物科技股份有限公司
申请日： 2017-02-10 - 公布日： 2017-06-13 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及免疫细胞冻存及复苏技术领域，特别涉及人体外周血单个核细胞低温冻存与复苏后再培养的方法，本发明的提高外周血单个核细胞冻存后再培养活性的方法，包括冻存人外周血单个核细胞时冻存液、冻存密度的选择以及复苏时保护液的选择，通过筛选合适的冻存液和冻存密度保存了外周血单个核细胞的细胞活性，复苏时选择合适的保护液，有利于更好的保护细胞的活性，从而大大提高了冻存的外周血单个核细胞的活性和利用率。
一种细胞冻存液及其制备方法应用

[发明专利]一种诱导分化人外周血单个核细胞的方法-CN200510067523.9无效
发明人：孙宝贵;李为真;戴秋艳 -专利权人：上海市第一人民医院
申请日： 2005-04-18 - 公布日： 2005-10-19 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明属生物技术领域，涉及一种将人外周血单个核细胞诱导分化为心肌细胞的培养方法。本发明方法从人外周血分离出单个核细胞，通过体外直接培养，用5－氮杂胞苷诱导其分化为心肌细胞。本发明方法诱导后的外周血单个核细胞具有心肌细胞的部分特点，又具有干细胞的特征。本方法可最大限度利用有分化潜力的干细胞，避免成体干细胞的损失。为人外周血单个核细胞诱导分化的分离和培养建立了方法学，为此类研究奠定了基础。本发明还为诱导后的单个核细胞回输体内后进一步分化为成熟的、有功能的心肌细胞，恢复心脏功能的临床应用提供了准备。
一种诱导分化人外周血单个细胞方法

[发明专利]外周血单个核细胞长期保存方法-CN202210866098.3有效
发明人：樊晋宇;池金鹏;程雪;赵亚琪;张诗薇 -专利权人：厦门锐杰天川生物科技有限公司;山东天川精准医疗科技有限公司
申请日： 2022-07-22 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种外周血单个核细胞长期保存方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将外周血单个核细胞混悬液与细胞冻存液混合；和(2)进行程序降温至‑70至‑90℃，然后转移至液氮中冷冻保存；其中，所述细胞冻存液为不含有DMSO、人白介素和白蛋白的细胞冻存液。本发明的外周血单个核细胞冻存方法，在保存12月的情况下，使得复苏细胞存活率达到95％以上，细胞生物学特性不发生变化，保证了外周血单个核细胞的生物学活性；本发明的外周血单个核细胞冻存液中不含动物血清以及DMSO、人白介素和白蛋白，因此不会引入外源蛋白，降低了动物病原污染的可能性，不会对人体免疫治疗产生影响，降低了成本。
外周血单个细胞长期保存方法

[发明专利]一种用于脓毒症诊断及预后评估的试剂盒-CN201911282235.3有效
发明人：宋振举;童朝阳;王建李;胡延妍;穆素成;尹俊;仇东则;朱鸣 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2019-12-13 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12Q1/6883 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于脓毒症诊断及预后评估的试剂盒，其包括：用于提取人外周血单个核细胞中RNA的RNA提取分离系统；用于检测人外周血单个核细胞中基因GPR174的mRNA表达量的GPR174基因检测系统；记载用于确定表达量高/低分界标准的数学模型的载体，当人外周血单个核细胞中GPR174的mRNA表达量不高于所述标准时，提示患有脓毒症；反之，当人外周血单个核细胞中GPR174的mRNA表达量高于所述标准时
一种用于脓毒症诊断预后评估试剂盒

[发明专利]一种外周血单个核细胞的提取收集方法-CN202011252394.1在审
发明人：王晓宇;林冠妃;郭康合;李崴;蔡开婷;张万程;李秋宛;王岱桑 -专利权人：海南优尼科尔生物科技有限公司
申请日： 2020-11-11 - 公布日： 2021-03-09 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种外周血单个核细胞的提取收集方法，包括以下步骤：1)外周血采集；2)外周血预处理；3)离心；4)提取血浆；5)血浆灭活；6)收集单个核细胞层；7)单个核细胞层离心；8)清洗；9)提取单个核细胞本发明属于细胞提取技术领域，具体是提供了一种利用Ficoll淋巴细胞分离液离心提取获得外周血单个核细胞，细胞得率高、活性高的外周血单个核细胞的分离方法。
一种外周血单个细胞提取收集方法

[发明专利]一种使用外周血检测抗原免疫原性的方法-CN202110049135.7在审
发明人：唐云霞;高志博;张义兴;苏小凡 -专利权人：深圳裕康医学检验实验室;深圳裕泰抗原科技有限公司
申请日： 2021-01-14 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：一种使用外周血检测抗原免疫原性的方法，包括：离心步骤，包括使用密度梯度离心管对外周血样本进行离心，分离得到外周血单个核细胞；多肽培养步骤，包括取部分外周血单个核细胞，培养过程中，分多次加入待测抗原多肽、培养基、细胞因子，培养得到被多肽刺激的外周血单个核细胞；树突状细胞培养步骤，包括取部分外周血单个核细胞，诱导培养，得到树突状细胞；检测步骤，将被多肽刺激的外周血单个核细胞与树突状细胞混合孵育，检测抗原多肽是否具有免疫原性通过短时间离心后，进行多肽刺激培养外周血单个核细胞，可快速检测待测抗原的免疫原性，显著简化操作步骤，缩短检测时间，并且只需少量外周血，显著降低样本的获取难度。
一种使用外周血检测抗原免疫原性方法

[发明专利]一种外周血单个核细胞无血清冻存液及冻存方法-CN201510083493.4有效
发明人：葛啸虎;陈海佳;王一飞;戴国胜;王小燕;罗二梅 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2015-02-13 - 公布日： 2017-01-11 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种外周血单个核细胞无血清冻存液，其按体积分数计包括以下组分：5～20％的二甲基亚砜、0.5～10％右旋糖酐40，余量为勃脉力A。本发明还公开了采用上述外周血单个核细胞无血清冻存液冻存外周血单个核细胞的方法。与现有技术相比，本发明的冻存液不含动物血清、人血清、细胞培养基，且冻存效果良好，细胞复苏后既可直接用于临床，又可在体外诱导成免疫细胞NKT、CIK，在临床上颇具应用价值。
一种外周血单个细胞血清冻存液方法

[发明专利]一种人外周血单个核细胞的冻存液及冻存方法-CN201710940304.X在审
发明人：赵翔;宋彩霞;曹玉昊;叶劲涛;王仁杰;黄启程;邱阳;李国焱;唐玲;胡小东 -专利权人：重庆金时代生物技术有限公司
申请日： 2017-10-11 - 公布日： 2018-04-17 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种人外周血单个核细胞的冻存液，按体积分数计，包括以下组分二甲基亚砜8‑15％、聚乙二醇6‑10％、人血白蛋白5‑10％，余量为勃脉力A，还包括海藻糖15‑30mg/ml、羟乙基淀粉15‑20mg冻存方法包括配制冻存液，提取人外周血单个核细胞，然后重悬细胞，再加入冻存液置于‑80℃冻存12‑14h，然后再转入液氮中保存。采用该冻存液保存人外周血单个核细胞时，其细胞存活率高，细胞活性较强，复苏后细胞扩增周期短。
一种人外周血单个细胞冻存液方法

[发明专利]一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用-CN201410690907.5有效
发明人：陈海佳;王一飞;葛啸虎;陈洁鸿;王小燕;罗二梅 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2014-11-25 - 公布日： 2018-06-08 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用。本发明所述培养方法先采集外周血，分离出血浆和外周血单个核细胞；将外周血单个核细胞用含所述血浆的M199培养基进行重悬，然后加入EGF因子培养3‑5天；去掉未贴壁的悬浮细胞，更换前述添加了血浆和EGF因子的M199培养基继续培养；当细胞达到80％‑90％融合时，消化细胞，获得培养后的PB‑MSC。本发明将从外周血分离出的外周血单个核细胞以有别于传统方式的不同培养基进行有效培养，避免采用动员剂，保证了培养后的PB‑MSC数量，同时提供了PB‑MSC在抗皮肤衰老中的应用。
外周血单个核细胞培养基血浆间充质干细胞人外周血外周血应用生物技术领域细胞传统方式皮肤衰老悬浮细胞有效培养贴壁重悬采集消化融合保证

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