本发明提供了一种抗人ROR1单克隆抗体及其制备方法与应用,所述抗体具有重链可变区和轻链可变区,重链可变区和轻链可变区各具有3个CDR,重链可变区的CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO21或NO27,CDR2为SEQ ID NO22或NO28,CDR3为SEQ ID NO23或NO29;轻链可变区的CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO24或NO30,CDR2为SEQ ID NO25或NO31,CDR3本发明的单体稳定性好,特异性强,通过的对特定细胞的监控就可以提前检测到白血病特异性标记,还可以结合乳腺癌细胞中的ROR1靶点,有利于沉默实验完成。