[其他]生产抗生素A40926复合物及其纯因子PA.PB.A.B.及B0的方法

摘要

本发明涉及一类新抗生素，称作抗生素A40926复合物和其因子A，B，B0，PA及PB。用培养新的ActinomaduraspATCC39727菌或其生产A40926的变种或突变体从而生产它们的方法，用这些新抗生素治疗传染病及致病微生物。本发明的抗生素属于能够结合酰基-D-丙氨酰-D-丙氨酸的万谷霉素抗生素类的糖肽类物质。

主权项

1、一种制备抗生素物质的方法，抗生素物质选自抗生素A40926复合物，抗生素A 40926因子A，抗生素A  40926因子B，抗生素A  40926因子Bo，抗生素A 40926因子A，抗生素A 40926因子PB，其混合物和其加成盐，其特征在于：非盐形式的抗生素A 40926因子A：A)紫外吸收光谱表现出下列最大吸收：                      λ  max(nm)a)0.1NHCl                 281b)磷酸盐缓冲液PH7.38      281                          300(肩峰)c)0.1N氢氧化钠或氢氧化钾  300d)甲醇                    282e)磷酸盐缓冲液pH9.0       282                          300(肩峰)B)红外吸收光谱表现出下列最大吸收(Cm-1)：3700-3100，3100-2800(医药用润滑油)；1655；1620-1560；1510；1480-1410(医药用润滑油)；1375(医药用润滑油)；1320-1250；1250-1190；1100-950；845；810；720(医药用润滑油)C)H-NMR波谱表现出下列几组信号(以ppm表示)，在DMSOd6中记录，270MHz，使用TMS作为内标准(0.00ppm)，(α=ppm)：α0.86(t′s，6H)；1.21(～11H)；1.43(2H)；2.01(2H)；2.31-2.34(3H)；4-6.2(～16H)；6.2-8(～23H)；8.44，9.22，9.66(宽带；动态质子)2.5-4：来自H2O峰的干涉D)相对于TeicoplaninA2组分2(Rt=20.3分)的滞留时间(Rt)为1.22，反相HPLC的分析条件如下：柱：Ultrasphere ODS(5毫米)Altex(Beckman)4.6毫米(i.d)×250毫米预备柱：Brownlee Labs RP18(5微米)洗脱液A：洗脱液B：洗脱：以洗脱液B在洗脱A中占5%-60%的线性梯度，洗脱40分钟流速：1.8毫升/分紫外检测：254nm内标准：TeicoplaninA2组分2(GruppoLepetitS.P.A)在相同的条件下，相对于睾酮(Roussel Uclaf)的滞留时间为0.60。E)元素分析，样品在惰性气体(△W4.6%)中以140℃先干燥之后进行，指出了各组分(平均)百分数的大约值：碳55.82%，氢5.17%，氮6.31%，氯(全部)4.24%，氯(离子)0.37%，900℃空气中无机残留为1.2%F)酸碱滴定，2-甲氧基乙醇(MCS)：水，4∶1，在加入稍过量的HCl之后，用KOH滴定，指出4个可离子化功能区具有以下的pKMCS：4.6，5.6，7。2，9.2，G)Rf值为0.24，相对于TeicoplaninA2组分2的Rf为0.70，层析系统如下：5%(W/V)Na2SO4溶液70乙腈              30使用硅烷化硅胶60F254Merck板(层厚0.25毫米)显色：--紫外明亮--Pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J.Chrom-atog。20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99(1953)]--在最小Davis培养基上使用B.subtilis ATCC 6633生物自显影，H)分子量为1716，由FAB-MS波谱推出，其表现M+H的峰为1717非盐形式的抗生素A  40926  因子B：A)紫外吸收光谱表现出下列最大吸收：                        λmax(nm)a)0.1NHCl                 282b)磷酸盐缓冲液pH7.38      281                          300(肩峰)c)0.1N氢氧化钠或氢氧化钾  300d)磷酸盐缓冲液PH9.0       283                          300(肩峰)e)甲醇                    282B)红外吸收光谱表现出下列最大吸收(cm-1)：3700-3080，3080-2700(医药用润滑油)；1720-1625；1625-1560；1505；1460(医药用润滑油)；1375(医药用润滑油)；1295；1230；1210；1150；1100-1040；1030；1015；970；890；840；810；720(医药用润滑油)C)1H-NMR波谱表现出下列各组信号(以ppm表示)，在DMSOd6中记录的1H-NMR270MHz，使用TMS作为内标准(0.00ppm)，(α=ppm)：α0.85(d，异丙基CH3′S)；1.15(～13H)；1.44(～2H)；2.02(2H)；2.32-2.35(3H)；4-6.1(～6H)；6.1-8(～23H)；8.52，9.30，9.68(宽带，动态质子)2.5-4：来自H2O峰的干涉D)滞留时间(Rt)为1.22，相对于TeicoplaninA2组分2(Rt=20.3分)的滞留时间为1.27，反相HPLC分析的条件如下：柱：Ultrasphere ODS(5微米)Altex(Beckman)4.6毫米(i.d.)×250毫米预备柱：Brownlee Labs RP18(5微米)洗脱液A：洗脱液B：洗脱：以洗脱液B在洗脱液A中占5%～60%的线性梯度，洗脱40分钟流速：1.8毫升/分紫外探测：254纳米内标准：TeicoplaninA2组分2(GruppolepetisS.P.A)E)元素分析，样品先在约140℃惰性气体中(Δw9.6%)干燥，指出各组分(平均)百分数大约为：碳54.09%；氢 5.13%；氮 6.34%；氯(全部)4.12%；氯(离子)0.39%；900℃空气中无机灰份为5%；F)酸碱滴定，2-甲氧基乙醇(MCS)：水，4∶1，当加入稍过量的HCl(pH2.7)后用KoH滴定，其表明4个可离子化功能区具有如下所示的pKmcs：4.5，5.6，7.2，9.2，G)Rf值为0.21，相对于TeicoplaninA2组分2的Rf值为0.53，层析系统如下：5%(w/v)Na2SO4溶液70乙腈              30使用硅烷化硅胶60F254Merck板(层厚0.25毫米)显色：--紫外明亮--Pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J.chromatog20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]--在最小Davis 培养基上用B.subilis ATCC 6633生物自显影H)分子量为1730，由FAB-MS波谱推出，其表示M+H峰在1731非盐形式的抗生素A 40926因子BA)紫外吸收光谱表明以下最大吸收：                       λ max(nm)a)0.1N HCl                282b)磷酸盐缓冲液PH7.38      281                          300(肩峰)c)0.1N氢氧化钠或氢氧化钾  300d)磷酸盐缓冲液pH9.0       283e)甲醇                    300(肩峰)                          282B)红外吸收光谱表现出下列最大吸收(cm-1)：3700-3080，3080-2700(医药用润滑油)；1720-1625；1625-1560；1505；1460(医药用润滑油)；1375(医药用润滑油)；1295；1230；1210；1150；1100-1040；1030；1015；970；890；840；810；720(医药用润滑油)C)1H-NMR波谱表现出下列几组信号(以ppm表示)，在DMSOd6中记录1H-NMR，270MHz，使用TMS作为内标准(0.00ppm)，(α=ppm)：α0.85(d，异丙基CH3′S)；1.15(～13H)；1.44(～2H)；2.02(2H)；2.32-2.35(3H)；4-6.1(～16H)；6.1-8(～23H)；8.52，9.30，9.68(宽带，动态质子)2.5-4：来自H2O峰的干涉D)相对于TeicoplaninA2组分2(Rt=20.3分)的滞留时间(Rt)为1.22，反相HPLC分析的条件如下：柱：Ultrasphere ODS(5微米)Altex(Beck-man)4.6毫米(i.d)×250毫米预备柱：Brownlee Labs RP18(5微米)洗脱液A：洗脱液B：洗脱：以洗脱液B在洗脱液A中占5%～60%的线性梯度洗脱40分钟流速：1.8毫升/分紫外检测：254nm内标准：TeicoplaninA2组分2(GruppoLepetitS.P.A)E)元素分析，样品先在140℃惰性气体(Δw9.6%)中干燥，指出各组分(平均)百分数大约为：碳54.09%，氢5.13%，氮6.34%，氯(全部)4.12%，氯(离子)0.39%，在900℃空气中无机灰分为5%F)酸碱滴定，2-甲氧基乙醇(MCS)：水，4∶1，加入稍过量HCl之后用KOH滴定，表明有4个可离子化的功能区具有下述pKmcs；4.5，5.6，7.2，9.2G)Rf值为0.21，相对于TeicplaninA2组分2的Rf值为0.53，层析系统如下：5%(w/v)Na2SO4溶液70乙腈              30使用硅烷化硅胶60F254Merck板(层厚0.25毫米)显色：--紫外明亮--Pauly 试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J.Chrom-atog 20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]--在最小Davis培养基上用B.subtilis ATCC 6633生物自显影H)分子量为1730，由FAB-MS波谱推出，其表现为M+H峰在1731非盐形式的抗生素A 40926 因子PAA)紫外吸收光谱表现出下列最大吸收：                    λmax(nm)a)0.1N HCl            282b)0.1N氢氧化钾        300c)磷酸盐缓冲液pH7.38  282                      300(肩峰)d)磷酸盐缓冲液pH9.0   283                      300(肩峰)B)红外吸收光谱表明下列最大吸收(cm-1)：3700-3100，3000-2800(医药用润滑油)；1760-1710；1655；1620-1550；1505；1460(医药用润滑油)；1375(医药用润滑油)；1260，1250-950；845；805；720(医药用润滑油)C)1H-NMR波谱表明下列各组信号(以ppm计)，在DMSOd6中记录1H-NMR，270MHz，用TMS为内标准(0.00ppm)，(α=ppm)：0.86，d′s(CH3)；1.15-1.22，m(CH2)n；1.41，m(CH2)；2.01，s(CH3)；2.01，m(CH2)；2.28，s(N-CH3)；4.26-5.96，br(缩肽的和芳族的CH′s)；6.33-7.73br(芳族的CH′s和缩肽的NH′s)br=宽峰d=双峰dd=双倍双峰m=多峰s=单峰t=三峰D)相对于TeicoplaninA2组分2(Rt=20.3分)的滞留时间(Rt)为1.15，反相HPLC分析的条件如下：柱：Ultrasphere ODS(5微米)Altex(Beckman)4.06毫米(i.d)×250毫米预备柱：Brownlee Labs RP18(5微米)洗脱液A：洗脱液B：洗脱：以洗脱液B在洗脱液A中占5%-60%的线性梯度洗脱40分钟流速：1.8毫升/分紫外检测：254nm内标准：TeicoplaninA2组分2(GruppoLepetitS.P.A)E)相对于TeicoplaninA2组分2的Rf值为0.62，层析系统如下：5%(w/v)Na2SO4溶液70乙腈              30使用硅烷化硅胶60F254Merck板(层厚0.25毫米)显色：--紫外明亮--Pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J.Chromatog.20，171，(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]--在最小Davis培养基上用B.subtils ATCC 6633生物自显影F)分子量约1758，由FAB-MS波谱推出，其一群峰中最大峰为1761，FAB-MS分析的工作条件如下：仪器：装有FAB枪Ion Tech 的 VGMod ZAB SE条件：阳性FAB，Xe加速电压为8Kv基质：硫代甘油-甘油1/l(v/v)非盐形式的抗生素A 40926因子 PBA)紫外吸收光谱表现出下列最大吸收：                    λmax(nm)a)0.1N HCl            282b)0.1N氢氧化钾        300c)磷酸盐缓冲液pH7.38  282                      300(肩峰)d)磷酸盐缓冲液pH9.0   282                      300(肩峰)B)红外吸收光谱表现出下列最大吸收(cm-1)：3700-3100，3000-2800(医药用润滑油)；1761-1710；1655；1620-1560；1605；1480-1420(医药用润滑油)；1375(医药用润滑油)；1320-1270；1230-1190；1150，1120-920；845；810；720(医药用润滑油)C.1)1H-NMR波谱表现出下列各组信号(以ppm表示)，在DMSOd6中，270MHz用TMS作为内标准(0.00ppm)，(α=ppm)多重性(属性)：0.84，d(异丙基CH3′s)；1.17，m(CH2)n；1.43m(CH2)，1.99，s(CH3)；2.01，m(CH2)；2.31，s(N-CH3)；2.79，dd(C-H)；3.70，m(C-H)；4.06-6.02，br(缩肽的或芳族的CH′s)；6.45-7.74，br(芳族的CH′S和缩肽的NH′s)；8.19-9.99，br(缩肽的NH′s和酚的OH′s)C.2)1H-NMR波谱表现出下列几组信号(以ppm计)，在DMSOd6+CF3COOD中，270MHz，以TMS为内标准(0.00ppm)，(α=ppm)多重性；(属性)：0.84，d(异丙基CH3′s)；1.13，m(CH2)n；1.40，m(CH2)；1.98，s(CH3)；2.00，m(CH2)；2.92，dd(C-H)；3.29-3.71，m(糖c-H′s)；4.07-6.09，s和m(缩肽的和芳族的CH′s)；6.45-7.83，s和m(芳族的CH′s和缩肽的NH′s)；8.17-10.38(缩肽的NH′s，酚的OH′s)D)滞留时间(Rt)为1.27，相对于TeicoplaninA2组分2(Rt=20.3分)的滞留时间为1.32，反相HPLC分析层析的条件如下：柱：Ultrasphere ODS (5微米) Altex(Beckman) 4.6毫米(i。d)×250毫米预备柱：Brownlee Labs RP18(5微米)洗脱液A：洗脱液B：洗脱：以洗脱液B在洗脱液A中占5%-60%的线性梯度洗脱40分钟流速：1.8毫升/分紫外检测：254nm内标准：TeicoplaninA2组分2(GruppoLepetitS.P.A)E)相对于TeicoplaninA2组分2的Rf值为0.53，层析系统为：5%(w/v)Na2SO4溶液70乙腈              30使用硅烷化硅胶60F254Merck板(层厚0.25毫米)显色：--紫外明亮--Pauly试剂，黄色，即重氮化对氨基苯磺酸[J.Chrom-atog.20，171(1965)，Z.Physiol.Chem.292，99，(1953)]--在最小Davis培养基上用B.subtilis ATCC 6633生物自显影F)分子量为1772，自FAB-MS波谱推出，其一群峰中的最大峰为1776，FAB-MS分析的工作条件如下：仪器：装备有FAB枪Ion Tech 的VG Mod ZAB SE条件：阳性FAB，Xe加速电压为8KV基质：硫代甘油-甘油1/l(V/V)；该方法包括，在有碳原，氮源和无机盐存在的浸没厌氧条件下，培养Actinomadura sp。ATCC39727菌，或抗生素A 40926生产菌的突变体或其变种，从发酵液中分离并回收所述的抗生素，如果需要，将其转变为所需要的盐。