[发明专利]一种基于二重荧光定量PCR鉴定毕赤酵母表达体系中目的基因拷贝数的方法

摘要

本发明公开了一种基于二重荧光定量PCR鉴定毕赤酵母表达体系中目的基因拷贝数的方法，广泛适用于以PAOX1为启动子的目的基因拷贝数的鉴定。该方法相较于传统qPCR测定目的基因拷贝数的优点在于：由于探针的存在，测量准确度和重复性远高于传统染料法qPCR。相比于传统探针法qPCR，D‑qPCR会节约1倍的试剂成本，且精密度与重复性可与之相媲美。在同一PCR管反应体系下，同时对PAOX1启动子基因和内参基因进行扩增及荧光定量分析，将筛选通量提高一倍，避免了分开扩增带来的加样误差，同时节约了成本。本专利提供一种通用D‑qPCR体系，包括引物、探针、反应体系的成分以及测量方法，用于高效、快速、准确鉴定与筛选目的基因的拷贝数。