[发明专利]一种基于pCAG-flox-neo载体的高效稳定的定点整合基因敲入方法在审
| 申请号： | 202111568113.8 | 申请日： | 2021-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN114480457A | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 庄乐南;贺津;巩倩;高云 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/64 | 分类号： | C12N15/64;C12N15/12;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京挺立专利事务所(普通合伙) 11265 | 代理人： | 余莹 |
| 地址： | 310030 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于pCAG‑flox‑neo载体的高效稳定的定点整合基因敲入方法，具体步骤如下：(1)将pCAG‑STOP2载体双酶切；将合成的片段经连接至pCAG‑STOP2载体；(2)将合成的载体再次酶切后连入polyA‑loxP得到pCAG‑flox‑neo载体；(3)将能够被sgRNA识别的猪pH11位点的sgRNA序列以及PAM序列插入到T3 promoter后，得到最终的基因敲入载体骨架pCAG‑floxP‑neo‑pH11；(4)将所需要的hKCNH2‑T618I及hmuPKD2片段通过PCR扩增，并通过一步克隆的方式插入到pCAG‑floxP‑neo‑pH11载体骨架中。本发明建立了一种高效、精准、操作简单同时可以敲除目的基因的方法，对于研究目的基因在哺乳动物或疾病模型中的作用具有重要科学意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 pcag flox neo 载体 高效 稳定 定点 整合 基因 方法 | ||
【主权项】：
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