[发明专利]一种高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶及其制备方法与应用有效
申请号: | 202110163535.0 | 申请日: | 2021-02-05 |
公开(公告)号: | CN112760303B | 公开(公告)日: | 2023-06-20 |
发明(设计)人: | 马龙;任思羽;程新宽;满淑丽 | 申请(专利权)人: | 天津科技大学 |
主分类号: | C12N9/10 | 分类号: | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12P13/12;C12P19/40 |
代理公司: | 苏州达权专利代理事务所(普通合伙) 32737 | 代理人: | 温明霞 |
地址: | 300457 天津*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | 本发明公开了一种高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶及其制备方法与应用,通过提取星海链霉菌的基因组;以基因组为DNA模板,采用PCR扩增技术,得到星海链霉菌中的甲硫氨酸腺苷转移酶的基因序列即metK目的片段;将metK目的片段与表达载体pET‑32a(+)进行双酶切后连接,构建重组质粒;采用热激化法将重组质粒转化到大肠杆菌BL21的感受态细胞中,并经过异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷诱导表达,得到SxMAT;通过对高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶进行变性后复性的方式,得到高纯度的SxMAT,所述SxMAT在温度为25‑55℃,pH值为8‑10.5时稳定性好,且产物的光学纯度(ee)90%,产率为80%,SxMAT与氟化酶联用构建体外双酶级联反应,有益于人们对链霉菌中氟化通路的理解以及衍生对氟化天然产物的应用。 | ||
搜索关键词: | 一种 立体 选择性 甲硫氨酸 腺苷 转移酶 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】:
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