[发明专利]高效催化L-苏氨酸合成2,5-DMP的质粒及其构建与应用

摘要

本发明公开了一种高效催化L‑苏氨酸合成2,5‑DMP的质粒及其构建与应用，属于基因工程技术领域。本发明构建了包含不同微生物来源L‑苏氨酸脱氢酶(TDH)的重组pRSFDuet‑tdhX质粒，以筛选出最高活性的TDH。然后，引入来源于Lactococcus cremoris的NADH氧化酶(NoxE)，并筛选出TDH和NoxE在pRSF‑Duet1质粒中的最佳构建方式。最终得到高效催化L‑苏氨酸合成2,5‑二甲基吡嗪的质粒pRSFDuet‑tdhEcnoxELc。将该质粒转入大肠杆菌BL21中进行全细胞转化实验，在含有5g/L L‑苏氨酸的转化体系中于37℃、200r/min孵化24h，可积累605.1±56.4mg/L的2,5‑DMP。此发明通过筛选不同来源的TDH酶和优化不同基因共表达方式，从而获得了一种能高效催化L‑苏氨酸合成2,5‑二甲基吡嗪的质粒，为构建2,5‑二甲基吡嗪高效催化质粒提供了新的思路。