[发明专利]高效催化L-苏氨酸合成2,5-DMP的质粒及其构建与应用

权利要求书

1.一种高效催化L-苏氨酸合成2,5-DMP的质粒，其特征在于，所述的质粒是以pRSFDuet-1为表达载体，在pRSFDuet-1的多克隆位点插入来源于大肠埃希氏菌属的苏氨酸脱氢酶(TDH)和来源于乳球菌属的NADH氧化酶(NoxE)组合而成的融合蛋白基因。

2.根据权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述的苏氨酸脱氢酶为以下任一：

(1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)具有苏氨酸脱氢酶活性的同工酶。

3.根据权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述的NADH氧化酶为以下任一：

(1)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

(2)具有NADH氧化酶活性的同工酶。

4.根据权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述的苏氨酸脱氢酶的碳端与NADH氧化酶的氮端之间包括柔性蛋白linker。

5.根据权利要求4所述的质粒，其特征在于，所述的柔性蛋白linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述的融合蛋白基因插入表达载体pRSFDuet-1的酶切位点BamHI和HindIII间。

7.一种权利要求1～6任一项所述的质粒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

依据NADH氧化酶的氨基酸序列在氮端添加柔性蛋白linker后，按照全细胞转化的宿主菌进行密码子偏好性优化，组合至苏氨酸脱氢酶的碳端，合成并连接至质粒pRSFDuet-1的启动子后，得到质粒。

8.一种包含权利要求1～6任一项所述的质粒的重组菌。

9.根据权利要求8所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌是以大肠杆菌为宿主。

10.一种权利要求8所述的重组菌全细胞转化L-苏氨酸合成2,5-二甲基吡嗪的方法，其特征在于，包括如下步骤：

重组菌采用诱导剂诱导培养，收集重组菌菌体，将重组菌菌体加入L-苏氨酸终浓度为3～7g/L的转化液中，在转化温度为35～40℃、转速为100～300r/min条件下转化L-苏氨酸合成2,5-二甲基吡嗪。