[发明专利]以PVDF膜为载体准确提取糖链的方法

摘要

本发明公开一种以PVDF膜为载体准确提取糖链的方法，是以Direct Blue 71染色液对印迹有目的蛋白质的PVDF膜进行染色，使用甲醇进行脱色、激活，关键是在胰酶消化前采用聚乙烯醇溶液浸泡PVDF膜，实现对PVDF膜的亲水化处理，解决了酶蛋白吸附在膜表面而不能进入膜内部影响酶切或β‑游离反应效率的问题。聚乙烯醇溶液低廉且不会对糖链解析图谱产生干扰，无需经过反复洗涤将其去除，具有操作简单，省时省力、降低成本、提高提取效率等优点，可避免糖蛋白因反复洗涤而丢失，重复性好，提高了糖链提取准确率。本发明有效提高了检测灵敏度，可从仅40 ng糖蛋白中检测出与原液中完全相同数量的糖链。