[发明专利]以PVDF膜为载体准确提取糖链的方法有效
| 申请号： | 202010164080.X | 申请日： | 2020-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN111363055B | 公开（公告）日： | 2021-09-24 |
| 发明（设计）人： | 董伟杰;李雨晴;刘钢;刘冬琪;李志 | 申请（专利权）人： | 大连医科大学 |
| 主分类号： | C08B37/00 | 分类号： | C08B37/00;C07K1/14 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人： | 闪红霞 |
| 地址： | 116044 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pvdf 载体 准确 提取 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种以PVDF膜为载体准确提取糖链的方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：
（1）使用凝胶将蛋白质进行梯度分离；
（2）将已梯度分离的蛋白质从凝胶印迹到PVDF膜上；
（3）将印迹有目的蛋白质的PVDF膜浸泡在Direct Blue 71染色液中进行染色；
（4）用甲醇脱色经Direct Blue 71染色的PVDF膜；
（5）晾干脱色后的PVDF膜；
（6）从PVDF膜剪下载有目的蛋白质部位的PVDF膜碎片并用纯水清洗；
（7）将PVDF膜碎片转移至EP管内；
（8）用甲醇浸泡PVDF膜碎片；
（9）去除甲醇，立即将PVDF膜碎片浸泡在聚乙烯醇溶液中，室温震荡15~25 min，所述聚乙烯醇溶液是质量体积比浓度为0.25%的纯水溶液；
（10）去除PVDF膜碎片中的聚乙烯醇溶液；
（11）向PVDF膜碎片中加入NH4HCO 3溶液及胰酶溶液进行孵育；
（12）停止胰酶消化反应；
（13）根据目的糖链类型进行糖链释放反应。
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