[发明专利]谷子在干旱胁迫下H在审
| 申请号： | 201911251294.4 | 申请日： | 2019-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN110747262A | 公开（公告）日： | 2020-02-04 |
| 发明（设计）人： | 郝雪峰;金竹萍;裴雁曦;王志清 | 申请（专利权）人： | 太原师范学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 61223 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 吴林 |
| 地址： | 030006 山西省晋中市*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，具体为谷子在干旱胁迫下H | ||
| 搜索关键词： | 扩增 酶切 银染 检测 谷子基因组DNA 基因工程技术 甲基化修饰 变化检测 费用降低 干旱胁迫 农业植物 植物叶片 根茎 样本DNA 基因学 可用 灵敏 果实 | ||
【主权项】：
1.一种谷子在干旱胁迫下H2S处理后DNA甲基化水平的变化检测方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：/nS1、提取谷子基因组DNA，获得DNA提取液；/nS2、对样本DNA做甲基化修饰；/nS3、酶切与连接：利用EcoRⅠ/HpaⅡ和EcoRⅠ/MspⅠ两组限制性内切酶进行剪切，剪切后在8℃的条件下与人工双链接头连接，获得扩增的DNA模板；/nS4、扩增与纯化：对DNA模板进行PCR扩增，对扩增后的产物进行电泳；/nS5、银染：电泳结束后，将大小玻璃板撬开，将大板放入已预冷的10％冰醋酸中进行固定，在摇床上震荡50分钟后，将玻璃板放入双蒸水中震荡2次，每次2分钟，然后将玻璃板放入已预冷的硝酸银溶液中进行染色，在摇床上震荡20分钟后，立即将染色后的玻璃板放入双蒸水中漂洗5-10秒，迅速取出放入预冷的碳酸钠溶液中进行显影，在摇床上震荡直到条带已全部显现并且条带清晰时，则可以终止显影；终止显影是将板放入10％冰醋酸中就可以完成；/nS6、记带及变异条带的回收：对引物组合进行筛选，选择条带多且清晰的条带进行最后的跑板实验，胶板上的每一条带即代表样本的一个CCGG位点，对于每一DNA样品来说，CCGG位点被切开标记为“1”，如果没有被切开，则标记为为“0”，注意的是记带时要挑选清晰明显的条带；最后将发生变异的条带进行切割回收,放入1XTE中冷冻保存；以作为连接转化的DNA模板；/nS7、变异片段的连接转化和测序；/nS8、将变异条带测序完成后，将测序结果放入BioEdit Sequence Alignment Editor软件进行分析，首先将载体和引物的序列找到并删除，即可得到变异条带完整序列；/nS9、通过检索数据库，得到的变异序列通过blastN对其在谷子全基因组中进行探寻和定位，再将变异序列通过blastX对其进行同源性蛋白的探寻与分析。/n
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