[发明专利]一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法在审
| 申请号： | 201910947859.6 | 申请日： | 2019-10-08 |
| 公开（公告）号： | CN110540959A | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 孟明耀;侯宗柳;王文举;高慧;赵旖旖;李琳;解燕华;唐维伟 | 申请（专利权）人： | 孟明耀;侯宗柳 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 53113 昆明合众智信知识产权事务所 | 代理人： | 张玺<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 650000 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法，1)清理，2)处理，3)培养，4)接种传代，本发明采用的组织块分离法获得的脐带间充质干细胞方法简单，成本低，细胞活性好，纯度高，最终收获细胞浓度高，获得的间充质干细胞方法简单，能快速高效分离MSC，培养时间缩短，培养第4～5天即可看到细胞从组织块爬出，最终收获细胞浓度高，整个脐带间充质干细胞培养工艺能够标准化、程序化、规范化。 | ||
| 搜索关键词： | 脐带间充质干细胞 组织块 细胞 传代 间充质干细胞 分离培养 高效分离 时间缩短 细胞活性 程序化 分离法 收获 扩增 接种 标准化 规范化 | ||
【主权项】：
1.一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法，其特征在于，包括下列步骤：/n1)清理，无菌条件下，获取新鲜脐带，将新鲜脐带用清洗液冲洗脐带表面，清洗去除脐带上的血管残留的血液与其他杂物；/n2)处理，将清洗后的脐带用手术刀去除脐静脉与脐带表面的羊膜层，然后将脐带剪成细条状，再将细条状脐带剪碎为1～3mm3的脐带组织块；/n3)培养，将所述脐带组织块平铺于细胞培养皿中，将水分挥发后加入含有10～20％胎牛血清的培养液中进行培养；/n4)接种传代，所述脐带组织块原代分离培养脐带间充质干细胞生长达到80～90％融合后，即可传代扩增培养，获得脐带间充质干细胞，用0.0625％胰酶/EDTA消化细胞，按3000～5000个/cm2接种，所述脐带间充质干细胞接种后4～5天可以达到95％融合，融合95％以上所述脐带间充质干细胞可以扩增至25代次以上。/n
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