[发明专利]非诊断目的基于poly(A)加尾及生物循环发光技术超灵敏检测miRNA的方法有效
| 申请号： | 201910865487.2 | 申请日： | 2019-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN110628874B | 公开（公告）日： | 2023-01-20 |
| 发明（设计）人： | 常津;陈明慧;宫晓群;王汉杰;李恒轩 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12Q1/682 | 分类号： | C12Q1/682 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 杨欢 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明属于miRNA检测领域，具体涉及一种非诊断目的基于poly(A)加尾及生物循环发光技术超灵敏检测miRNA的方法，包括下述步骤：1)高特异性的磁球探针的制备；2)磁球探针结合分离目标miRNA；3)poly(A)加尾放大信号；4)生物循环发光信号放大。本申请能够实现样品中miRNA的高效特异性检测，通过分子茎环探针与磁球的协同作用，可以从待测样品中高特异性的分离出待检miRNA，实现高特异性检测。 | ||
| 搜索关键词： | 诊断 目的 基于 poly 生物 循环 发光 技术 灵敏 检测 mirna 方法 | ||
【主权项】：
1.一种非诊断目的基于poly(A)加尾及生物循环发光技术超灵敏检测miRNA的方法，其特征在于，包括下述步骤：/n1)高特异性的磁球探针的制备:将链霉亲和素化的磁球与生物素化的分子茎环探针进行孵育反应得到；/n2)磁球探针结合分离目标miRNA:将步骤1)得到的磁球探针加入到待测样品中进行反应，磁分离纯化去除上清液，出去非目标RNA分子；/n3)poly(A)加尾放大信号：poly(A)聚合酶协同poly(A)聚合酶缓冲溶液针在步骤2)得到结合有目标miRNA的磁球探针上进行聚合反应，在miRNA的3’羟基末端延伸出重复的腺嘌呤核糖核苷酸序列，实现信号放大；/n4)生物循环发光信号放大：核酸外切酶T对磁球上结合的腺嘌呤核糖核苷酸序列进行切割反应，形成AMP；通过加入腺苷酸激酶、丙酮酸激酶、脱氧胞嘧啶三磷酸和磷烯醇丙酮酸谷氨酸，可以实现AMP-ADP-ATP的转换，结合荧光素酶检测体系后实现ATP的循环检测，通过收集生物发光信号强度的变化即可实现miRNA的超灵敏定量检测。/n
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