[发明专利]通过过表达马铃薯StDWF1基因促进马铃薯块茎萌芽的方法

摘要

本发明提供了一种通过过表达马铃薯StDWF1基因促进马铃薯萌发的方法，包括：(1)通过农杆菌介导制备过表达马铃薯StDWF1材料；(2)过表达马铃薯StDWF1材料的鉴定；(3)组织培养过表达马铃薯StDWF1材料；(4)将步骤(3)所得材料培养15天后移栽到大棚培养，最后测定块茎的萌发时间。本发明中StDWF1基因参与马铃薯块茎的萌发过程，通过过表达StDWF1基因可促进马铃薯块茎萌发，比对照组萌发时间提早至少15天，进而提高了其产量。

主权项

1.一种通过过表达马铃薯StDWF1基因促进马铃薯萌发的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过农杆菌介导制备过表达马铃薯StDWF1材料①制备转化后的农杆菌菌液采用限制性内切酶对含有StDWF1目的基因片段的表达载体和过表达载体进行双酶切，将酶切得到的载体和目的片段回收并连接，将连接产物转化至感受态细胞中，挑取单菌落扩繁、提取质粒，经PCR、酶切和测序鉴定后转化到根癌农杆菌的感受态细胞中，制得转化后的农杆菌菌液；②马铃薯苗的诱导以马铃薯苗的茎段作为外植体接入基本培养基中，置于温度为18±1℃、光照时间为8h/16h day/night、光照强度为35‑45μmol m^‑2s^‑1的条件下培养15‑20天；③农杆菌的活化及重悬④预培养及共培养预培养：取培养了15‑20天的马铃薯苗，在无菌条件下取中间生长健壮且无芽眼的茎段，置于预培养基上，于20‑24℃暗培养2‑3天；共培养：将重悬的农杆菌浸染预培养后的茎段2‑3min，然后用无菌水清洗2遍，去掉多余水分后，接入垫有一层滤纸的共培养基中，于24‑26℃暗培养36h；⑤芽诱导及根诱导芽诱导：将共培养后的茎段放入含100mg/L Cef的无菌水中清洗3‑4遍，去掉多余水分后转入芽筛选培养基中进行培养，培养温度为23±1℃，光照强度为35‑45μmol m^‑2s^‑1，光照时间为16h/8h day/night，每隔10‑14天更换一次培养基；根诱导：将长至0.5‑1cm的再生芽剪下接入生根筛选培养基中进行培养，培养温度为20±1℃，光照强度为55‑65μmol m^‑2s^‑1，光照时间为16h/8h day/night；(2)过表达马铃薯StDWF1材料的鉴定筛选步骤(1)所得材料中能够正常长出根的株系，提取其基因组DNA，以基因组DNA为模板进行目的基因PCR扩增及测序，确定转基因株系；(3)组织培养过表达马铃薯StDWF1材料将步骤(2)确定的转基因株系在基本培养基上进行培养，将培养10‑15天后的转基因植株幼苗的顶芽或带叶的茎段1.0‑1.5幼嫰部分接种到MS培养基中，进行培养；(4)将步骤(3)所得材料培养15天后移栽到大棚培养，最后测定块茎的萌发时间。