[发明专利]一种大肠杆菌菌株的制备方法在审
| 申请号： | 201910736051.3 | 申请日： | 2019-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN110484483A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 张沨;王新飞;王兴春 | 申请（专利权）人： | 山东汇冠康博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/01;C12R1/19 |
| 代理公司： | 11411 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张学府<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 266001 山东省青岛*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种大肠杆菌菌株的制备方法，所述方法包括以下步骤：出发菌的活化，NTG诱变处理，产醇途径相关基因的转入，筛选目标突变株，本发明通过NTG诱变的方法对大肠杆菌J16进行多轮突变制作突变库，利用含有单一氨基酸的培养基进行筛选，在该过程中还加入大肠杆菌产醇途径相关基因leud，kivd和yqhd，最终获得的N65菌株能够利用L‑丙氨酸、L‑丝氨酸、L‑苏氨酸、L‑色氨酸、L‑甲硫氨酸、L‑赖氨酸、L‑苯丙氨酸、L‑谷氨酰胺、L‑谷氨酸和L‑组氨酸作为唯一碳源进行生长。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 相关基因 谷氨酸 大肠杆菌菌株 筛选 单一氨基酸 苯丙氨酸 谷氨酰胺 甲硫氨酸 唯一碳源 培养基 丙氨酸 出发菌 赖氨酸 色氨酸 丝氨酸 苏氨酸 突变库 突变株 组氨酸 多轮 活化 菌株 制备 突变 转入 生长 制作 | ||
【主权项】：
1.一种大肠杆菌菌株的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1、出发菌的活化：以实验室保藏的大肠杆菌J16作为出发菌，将所述出发菌在固体培养基中划线，并在30℃-37℃的环境下培养出单菌落，将所述单菌落在液体培养基中培养，获得活化的菌体；/n步骤2、NTG诱变处理：将涂布有菌体液的无菌载片置于处理源下进行诱变处理获得突变库，/n所述菌体液包括活化的菌体和浓度为20％的甘油，且所述活化的菌体与所述浓度为20％的甘油的体积比为1:1；/n步骤3、选择步骤2中获得的突变库中的多个单菌落涂布于筛选培养基上培养，选择能够正常生长的菌株作为目标突变株；/n步骤4、产醇途径相关基因的转入：将leud，kivd和yqhd基因转入到步骤2获得的目标突变株中，得到诱变菌株；/n步骤5、将步骤4中得到的目标突变株重复步骤2-4至少两次获得大肠杆菌诱变菌株N65。/n
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