[发明专利]一种大肠杆菌菌株的制备方法在审
| 申请号： | 201910736051.3 | 申请日： | 2019-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN110484483A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 张沨;王新飞;王兴春 | 申请（专利权）人： | 山东汇冠康博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/01;C12R1/19 |
| 代理公司： | 11411 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张学府<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 266001 山东省青岛*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 相关基因 谷氨酸 大肠杆菌菌株 筛选 单一氨基酸 苯丙氨酸 谷氨酰胺 甲硫氨酸 唯一碳源 培养基 丙氨酸 出发菌 赖氨酸 色氨酸 丝氨酸 苏氨酸 突变库 突变株 组氨酸 多轮 活化 菌株 制备 突变 转入 生长 制作 | ||
1.一种大肠杆菌菌株的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1、出发菌的活化：以实验室保藏的大肠杆菌J16作为出发菌，将所述出发菌在固体培养基中划线，并在30℃-37℃的环境下培养出单菌落，将所述单菌落在液体培养基中培养，获得活化的菌体；
步骤2、NTG诱变处理：将涂布有菌体液的无菌载片置于处理源下进行诱变处理获得突变库，
所述菌体液包括活化的菌体和浓度为20％的甘油，且所述活化的菌体与所述浓度为20％的甘油的体积比为1:1；
步骤3、选择步骤2中获得的突变库中的多个单菌落涂布于筛选培养基上培养，选择能够正常生长的菌株作为目标突变株；
步骤4、产醇途径相关基因的转入：将leud，kivd和yqhd基因转入到步骤2获得的目标突变株中，得到诱变菌株；
步骤5、将步骤4中得到的目标突变株重复步骤2-4至少两次获得大肠杆菌诱变菌株N65。
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌菌株的制备方法，其特征在于：所述固体培养基为LB固体培养基，所述液体培养基为LB液体培养基。
3.根据权利要求2所述的大肠杆菌菌株的制备方法，其特征在于：所述筛选培养基包括不含NH4Cl的M9液体培养基中添加了单一的L-氨基酸和氨基酸类似物的培养基。
4.根据权利要求3所述的大肠杆菌菌株的制备方法，其特征在于：所述L-氨基酸包括20种天然氨基酸中的一种，所述氨基酸类似物包括正缬氨酸。
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