[发明专利]基于毛细管电泳法定量检测FLT3-ITD基因突变的方法在审
| 申请号： | 201910726678.0 | 申请日： | 2019-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN110511983A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 何贵伦;张鹏;谢珍;唐春花;邢宽;李平;安雪茹 | 申请（专利权）人： | 南京实践医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 11265 北京挺立专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 陈列生<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 210032 江苏省南京市江北新区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学技术领域，且公开了基于毛细管电泳法定量检测FLT3‑ITD基因突变的方法，包括如下步骤：一、材料及试剂的准备，购入实验操作中所需的DNA提取试剂盒、PCR MIX、引物生工合成和甲酰胺；二、检测样本的处理，准备:1‑2ml外周血或骨髓血、DNA/RNA(OD260/280值1.8‑2.0)的血样标本，按照试剂盒中提取DNA的步骤进行相关实验操作。该基于毛细管电泳法定量检测FLT3‑ITD基因突变的方法，具备只需设计一对带有荧光标记的引物即可解决个体差异性问题，且操作简单，便于人们对FLT3‑ITD基因突变的的检测，可用于对具有FLT3‑ITD基因突变的白血病患者的诊断及追踪预后疗效，同时监测MRD的动态变化的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 基因突变 毛细管电泳法 定量检测 实验操作 引物 分子生物学技术 材料及试剂 个体差异性 动态变化 血样标本 荧光标记 提取DNA 骨髓血 甲酰胺 试剂盒 外周血 检测 预后 可用 白血病 样本 合成 追踪 诊断 监测 | ||
【主权项】：
1.基于毛细管电泳法定量检测FLT3-ITD基因突变的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n一、材料及试剂的准备/n购入实验操作中所需的DNA提取试剂盒、PCR MIX、引物生工合成和甲酰胺；/n二、检测样本的处理/n准备:1-2ml外周血或骨髓血、DNA/RNA(OD260/280值1.8-2.0)的血样标本，按照试剂盒中提取DNA的步骤进行相关实验操作，具体步骤如下：/na、使用前在CB3和WB3中加入不同体积的无水乙醇并进行离心操作；/nb、准备2ml的离心管，在离心管中加入250μl待提取的全血；/nc、在步骤b的基础上加入20ul的蛋白酶K和500ul BB3于样本中，并在充分涡旋混匀后进行室温孵育；/nd、在步骤c的基础上将全部的混合溶液加入离心柱中进行充分离心，离心操作完成后弃流出液；/ne、在步骤d的基础上加入500ul CB3溶液(使用前请先检测是否加入无水乙醇)再次进行充分离心，离心操作完成后弃流出液；/nf、在步骤e的基础上加入500ul WB3溶液(使用前请先检测是否加入无水乙醇)再次进行充分离心，离心操作完成后弃流出液；/ng、在步骤f的基础上再次加入500ul CB3溶液(使用前请先检测是否加入无水乙醇)再次进行充分离心，离心操作完成后弃流出液；/nh、在步骤g的基础上再次进行充分离心操作，彻底去除残留的WB3；/ni、将离心柱置于一干净的离心管中，在柱子中央加入50-200ul预热EB溶液，室温静置1min，在12000rpm的转速下持续离心1min，洗脱DNA，得到DNA溶液，测下OD值并记录下来；/n三、对FLT3-ITD基因进行PCR扩增/n对PCR产物进行100倍的稀释，加入1ul PCR进行毛细管电泳；/n四、检测结构分析/n采用Genmapper软件进行数据分析，首先判断野生型是否出现，如果野生型出现，表明实验过程没有问题，再观察是否出现FLT3-ITD基因突变型，根据Genmapper软件给出的峰面积算出样本中FLT3-ITD基因突变比例。/n
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