[发明专利]利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法

摘要

本发明公开了一种利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法，利用了DNA与RNA碱基互补配对原则，首先，设计了具有发夹结构的功能探针，当目标物（待测样品microRNA）存在时，特异性核酸内切酶（DSN酶）切割DNA‑RNA杂交体的DNA部分得到8‑17DNAzyme。然后，8‑17DNAzyme能特异性识别固定在电极表面的H2序列中腺嘌呤核糖核苷酸rA位点进行切割。最后，电极表面被DNAzyme特异性切割后与电极表面相连的DNA序列依次与序列Link1、Link2、H3和H4自组装形成电化学生物传感器用于目标检测。所建立的方法灵敏度高，可用于复杂体系的microRNA的直接检测。

主权项

1.一种利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：首先设计能与目标microRNA碱基互补配对且含8‑17DNAzyme序列的双功能探针H1；双特异性核酸内切酶特异性切割DNA‑RNA杂交的DNA部分， H1探针被切割得到游离的8‑17DNAzyme序列，而microRNA被释放出来继续与未反应H1探针杂交循环切割，实现第一次目标循环；然后将发夹探针H2固定在金电极上；当金属离子存在时，前述8‑17DNAzyme会特异性识别H2 序列中腺嘌呤核糖核苷酸rA位点并特异性切割，H2探针被切断成两部分，一部分与电极相连，一部分为游离的碱基序列，同时释放8‑17DNAzyme继续切割未反应的电极表面的H2探针实现第二次循环放大；电极表面的H2被DNAzyme切断后，依然有部分碱基序列固定在电极表面上，这部分碱基序列会与连接探针Link1和Link2、杂交探针H3和H4进行自组装，形成一条dsDNA链；最后，六氨合钌通过静电作用吸附在dsDNA骨架上，通过检测六氨合钌的电化学信号，实现对microRNA的超灵敏检测。