[发明专利]酿酒酵母细胞催化生产γ-氨基丁酸方法及γ-氨基丁酸在审
| 申请号： | 201910488794.3 | 申请日： | 2019-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN110106211A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 占纪勋 | 申请（专利权）人： | 杭州唯铂莱生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P13/00 | 分类号： | C12P13/00;C12N15/60;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 深圳市深联知识产权代理事务所(普通合伙) 44357 | 代理人： | 张琪 |
| 地址： | 310051 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，其目的在于提供一种用酿酒酵母细胞催化生产γ‑氨基丁酸的方法，(1)从谷氨酸脱羧酶中提取目标基因；对所述目标基因进行PCR扩增，并连接到质粒重组构建克隆载体；(2)通过限制性内切酶对克隆载体进行酶切处理得到目标基因片段，连接到酵母载体中，产生重组质粒；(3)通过醋酸锂快速转化法将重组质粒导入酿酒酵母中，获得重组酿酒酵母细胞；(4)将重组酿酒酵母细胞培养在Na2HPO4柠檬酸缓冲液中，L‑谷氨酸和5'‑磷酸吡哆醛混合，反应得到γ‑氨基丁酸。本发明还提供一种γ‑氨基丁酸。酿酒酵母细胞生产速度快培养简单，外源基因表达系统完善，催化效率高，并且成本低，易控制。 | ||
| 搜索关键词： | 氨基丁酸 酿酒酵母细胞 重组酿酒酵母 催化生产 克隆载体 目标基因 重组质粒 细胞培养 谷氨酸 谷氨酸脱羧酶 目标基因片段 柠檬酸缓冲液 生物技术领域 外源基因表达 限制性内切酶 磷酸吡哆醛 催化效率 酵母载体 酿酒酵母 系统完善 质粒重组 醋酸锂 构建 酶切 细胞 转化 生产 | ||
【主权项】：
1.一种用酿酒酵母细胞催化生产γ‑氨基丁酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取基因：从谷氨酸脱羧酶中提取目标基因；(2)构建质粒：对所述目标基因进行PCR扩增，并连接到质粒重组构建克隆载体；通过限制性内切酶对所述克隆载体进行酶切处理得到所述目标基因片段，并连接到酵母载体中，产生重组质粒；(3)构建重组酿酒酵母细胞：通过醋酸锂快速转化法将所述重组质粒导入酿酒酵母中，获得重组酿酒酵母细胞；(4)催化反应：将所述重组酿酒酵母细胞培养在0.05～0.5M在Na2HPO4柠檬酸缓冲液中，pH为3.8～7.0，当细胞密度为OD6002～OD60045时，与0.05M～1M L‑谷氨酸和0.01～1mM5′‑磷酸吡哆醛混合，在5℃～70℃条件下反应1～14h得到γ‑氨基丁酸。
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